[发明专利]试剂盒及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体的，涉及试剂盒及其用途，更具体的，本发明涉及一种试 剂盒、试剂盒的用途、一种构建目标区域测序文库的方法、一种测序方法、一种检测目标区域 变异的方法和装置、以及一种对肺癌进行早期筛查的方法和装置。

背景技术

肿瘤是严重威胁人类健康的疾病之一，20世纪70年代以来，我国癌症发病及死亡率一直 呈上升趋势，至90年代的20年间，癌症死亡率上升29.42％，年龄调整死亡率上升11.56％。 2000年癌症发病人数约180-200万，死亡140-150万。恶性肿瘤发病率全国35岁至39岁年龄 段为87.07/10万，40岁至44岁年龄段几乎翻番，达到154.53/10万；50岁以上人群发病占全 部发病的80％以上，60岁以上癌症发病率超过1％，80岁达到高峰。全国肿瘤死亡率为180.54/10 万，每年因癌症死亡病例达270万例。我国居民因癌症死亡的几率是13％[赫捷,陈万青.(2012). 2012中国肿瘤登记年报.军事医学科学出版社:18-28.McBride,D.J.andA.K.Orpana,etal. (2010)."Useofcancer-specificgenomicrearrangementstoquantifydiseaseburdeninplasmafrom patientswithsolidtumors."GenesChromosomesCancer49(11):1062-1069.]。癌症不仅严重影响 劳动人民的健康，而且成为医疗费用上涨的重要因素。我国每年耗费大量资金用于癌症病人的 医疗费用，带来巨大的经济负担。

肺癌已是世界上最常见的癌症和因癌症死亡的最常见原因。截止到2008年，估计有161 万新发病例(占所有新发癌症中的12.7％)和1.38万例死亡(占所有癌症死亡中的18.2％)。 《2012中国肿瘤登记年报》显示我国恶性肿瘤发病和死亡第一位的是肺癌，而肺癌疗效得不 到提高的主要障碍是诊断时病期已晚。I期肺癌患者如果立即进行手术切除肿瘤，其生存率达 92％，然而未治疗的I期患者则将在5年内死亡[HenschkeCI,YankelevizDF,LibbyDM,etal. SurvivalofpatientswithstageIlungcancerdetectedonCTscreening.NEnglJMed.2006, 355(17):1763-1771.]。因此对肺癌进行早期筛查和预防，可使患者获得很好的生存结果，有效 减低其发生率和死亡率。

癌症的发生时一个渐进缓慢的过程，如能够对其做到早期发现，临床有效治疗，到术后复 发监测进行全面控制，可有效的降低其发生率和死亡率，将有着巨大的经济效益和社会效益。

循环DNA是存在于血液、滑膜液等体液中的细胞外游离DNA，研究发现许多肿瘤患者循 环DNA与正常人相比有很大差异，由于肿瘤细胞凋亡，癌症患者循环DNA中含有一定的肿 瘤标志物。近年来肿瘤患者血液中循环游离DNA的基因检测诊断已成为研究热点，研究显示 血液中循环肿瘤DNA有可能成为一种新的肿瘤早期诊断及预后判断的标志物。检测血液中循 环游离DNA中的肿瘤标志物检测具有区别于传统组织肿瘤标志物检测方式，具有无创、随时 监控和早期筛查等优势，并且对循环游离DNA的取样检测避免了当前分子诊断需要采集癌组 织作为标本来源的困难，是一种很有潜力的肿瘤标志物。同时将血液肿瘤标志物与临床检验结 合起来，可以辅助肿瘤的早期诊断和实时监控或者为肿瘤的早期诊断或监控提供重要线索，有 可能能成为肿瘤的早期筛查和预后判断提供重要依据。

目前临床上对于这些常见高发癌症的早期诊断和术后监控，拥有许多手段，但大部分方法 在特异性和准确性方面尚不足以满足临床检测的要求。如今高通量测序技术已经在肿瘤检测中 得到了有效应用，但由于肿瘤发病早期的血浆游离DNA含量较低，而且测序技术本身存在一 定的错误率等，采用传统的测序方法将无法分辨测序错误和肿瘤标本中低频率突变，不利于这 些癌症的早期诊断和术后监控。因此开发易操作、低损伤、高准确的技术是癌症早期筛查和术 后监控所急需的。

发明内容