[发明专利]乙二胺四乙酸二钠单克隆抗体

说明书

技术领域

该发明属生物技术领域。利用此单克隆抗体能特异性识别Na₂-EDTA及其螯合了Ca²⁺，Mg²⁺后的螯合物Ca-EDTA和Mg-EDTA的能力，应用于体外细胞实验及体内动物实验的Na₂-EDTA的生物效应研究。为研究Na₂-EDTA的生物效应提供了一种新的途径。

背景技术

乙二胺四乙酸(EDTA)是一种有机化合物，不溶于冷水、醇及一般有机溶剂，微溶于热水，可溶于碱性溶液。钠盐的溶解度在22℃为10.8g/L，80℃为23.6g/L。一般用乙二胺四乙酸的钠盐(Na₂-EDTA)代替EDTA。Na₂-EDTA可以与大多数金属离子形成多个五环结构的比较稳定的螯合物，因此在工业、食品及医疗领域被广泛应用。但Na₂-EDTA几乎不可被生物降解，并且不能被沉淀吸附，因此在水体系统中成为持久性污染物。因其Ca²⁺螯合特性，Na₂-EDTA在口腔领域已成为常规试剂。Na₂-EDTA在水体系统的富集及其在医疗领域，尤其是口腔医学中的应用，都导致机体极易受到Na₂-EDTA的影响。深入了解Na₂-EDTA的生物效应是有必要的。已有多位学者从血管渗透性、细胞毒性、巨噬细胞功能和动物实验等方面证实了Na₂-EDTA的不良影响。目前认为其机制是Na₂-EDTA的金属螯合作用使金属蛋白和金属蛋白酶失去金属辅助因子，间接导致蛋白质活力的丧失。Na₂-EDTA的生物效应除了其突出的螯合作用，目前尚不知是否还存在其他机理，也未见相关文献报道。

发明内容

本发明提供了抗Na₂-EDTA单克隆抗体，该抗体能够特异性识别Na₂-EDTA及其螯合了Ca²⁺，Mg²⁺后的螯合物Ca-EDTA和Mg-EDTA，可用于从细胞蛋白质的角度深入探索Na₂-EDTA的可能生物效应。所述单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO:C2014130的杂交瘤细胞株4G1A6B4特异稳定分泌产生。

保藏号为CCTCC NO:C2014130的杂交瘤细胞株4G1A6B4于2014年6月23日保藏于中国典型培养物保藏中心，其地址为中国.武汉.武汉大学，保藏号为CCTCC NO:C2014130。

Na₂-EDTA间接竞争ELISA结果显示：该单克隆抗体能特异性识别Na₂-EDTA。

抗体特异性鉴别实验显示：该单克隆抗体能特异性识别Ca-EDTA和Mg-EDTA，而对Fe-EDTA，Cu-EDTA，Zn-EDTA和Mn-EDTA的识别能力较差。可能是因为抗体针对Na₂-EDTA的空间结构，Na₂-EDTA螯合了原子半径相对较小的Ca²⁺，Mg²⁺后空间结构变形小，抗体仍能识别，Na₂-EDTA螯合了原子半径较大的Fe²⁺，Fe³⁺，Cu²⁺，Zn²⁺，Mn²⁺后空间结构变形大，导致单克隆抗体不能识别。

hPDLF的western blotting结果显示：与Na₂-EDTA或Ca-EDTA共培养后的hPDLF与正常培养的hPDLF之间出现差异蛋白。说明hPDLF存在与Na₂-EDTA和Ca-EDTA直接发生作用的特定蛋白。

因此，首先，本发明提供了能特异性识别Na₂-EDTA，Ca-EDTA和Mg-EDTA的单克隆抗体。

其次，本发明提供了所述单克隆抗体用于从蛋白质角度探索Na₂-EDTA和Ca-EDTA在hPDLF的生物效应。

再次，本发明提供了所述单克隆抗体可用于提纯上述发现的差异蛋白，进行蛋白特征检测。