[发明专利]一种检测癌症标志物微小核糖核酸的试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测癌细胞标志物微小核糖核酸的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中包含四螺旋结构DNA分子探针、引物1、引物2、发夹DNA、聚合酶、切刻内切酶、缓冲液和SERS信号探针；

所述四螺旋结构DNA分子探针的制备方法包括：

用0.1M咪唑-盐酸盐中性溶液清洗、活化磁珠；将200μL序列三的溶液加入到200μL咪唑溶液活化好的磁珠混合，反应6h后加入200μL序列一和序列二的溶液，放在体积1L的保温桶里，80℃水浴中随室温缓慢降温12h，磁分离洗涤后，得连有磁珠的四螺旋结构DNA分子探针，稀释至200μL备用；

所述序列一为：

5'-TCAACATCAGTCTGATAAGCTAGGGAACGATCCCGACTGTGCCA-3'；

所述序列二为：

5'-AGAAAGGAGGACTTTCATACCTCGAGGACCTCAGCAGCTTCGAGCCTGGTGCGTGCTCAGTCACTGAGCAACTCAACTCGCCATCTGAGTCTGGACACGCTGCAGGCTCGAAGCTGC-3'；

所述序列三为：

5'-NH₂-T₆-GGTCACAGTCGGGATCGTTCCTGAGTTGCTCAGTGACTGAGCACGCACCAGGCTCGAAGCTGCTTTAAGCCTCACGGTTCGCATGACGGGTCAACC-TGCGTCGACGTGTCCCTGGACTTTAAGAAATCTCGAGCTTCGAGCCTGCAGCGTGTCCAGACTCAGATGGCGAGTCTAGCTTATC-3'；

所述引物1的序列为：

5'-AGAGTTACTTAG-3'；

所述引物2的序列为：

5'-TGGCACAGTCGGGAT-3'；

所述发夹DNA的序列为：

5'-NH2-T6-AGAAAGGAGGACTTTCATACCTCGAGGACCTCAGCGTCCTCCTTTCT-3'；

所述SERS探针的制备方法包括：

将序列五的ROX-DNA和序列四的捕获探针DNA按50:1的比例均匀混合，然后加入一定量的TCEP活化30min。随后在活化好的DNA混合液中加入1mL新鲜制备的金纳米粒子溶液，轻微振荡避光反应6h，将金纳米粒子溶液与DNA的混合溶液在10mM醋酸盐缓冲液中避光放置8h，在经过12000rpm的转速离心30min后，洗涤后得到油状物，即SERS信号探针；

所述序列五为5'-ROX-TTTTTTCCTAGCGAC-SH-3'；

所述序列四为5'-SH-AGAAAGGAGGACGC-3'。