[发明专利]一种快速检测乳酸乳球菌的引物及其检测方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物检测领域，特别涉及一种快速方便检测乳酸乳球菌的引物及其检测方法和试剂盒。

背景技术

酸乳球菌(Lactococcus lactis)作为乳球菌属中最具代表性的菌种。乳酸乳球菌已经被美国食品药品管理局和世界卫生组织认定为GRAS(Generally RecognizedAs Safe)，是相当安全的食品微生物。所以常被用在食品工业里面。乳酸乳球菌最初被鉴定为乳酸链球菌(Streptococcus lactis)，直到1987年才被重新划分为乳酸乳球菌。目前乳酸乳球菌包括4个亚种，分别为乳酸乳球菌乳酸亚种(L.lactis subsp.lactis)，乳酸乳球菌乳脂亚种(L.lactis subsp.cremoris)，乳酸乳球菌霍氏亚种(L.lactis subsp.hordniae)和L.lactis subsp.tructae。目前已经发现在所有分析过的乳酸乳球菌菌株中均含有45kDa的未知功能的分泌蛋白质，此蛋白质被命名为Usp45。此蛋白质的发现为乳酸乳球菌进行分子标记，并提供特异性的检测方法提供了可能。

问题是市场上乱用现象比较严重，乳酸乳球菌和乳酸链球菌不分，混用、乱用现象比较突出。因此需要建立乳酸乳球菌的快速检测方法的将乳酸乳球菌与其它细菌菌株区分开来。

发明内容

为解决上述问题，本发明采用了如下技术方案：

本发明的一个目的是提供一种乳酸乳球菌的特异性标记分子，其特征在于：特异性标记分子是编码乳酸乳球菌Usp45蛋白质的基因。

进一步，本发明所提供的乳酸乳球菌的特异性标记分子，还可以具有这样的特征：其中，特异性标记分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1的第33位至第693位所示。

本发明的另一个目的是提供一种检测乳酸乳球菌的引物对，其特征在于：

该引物对中，一条引物和乳酸乳球菌的特异性标记分子的序列其中一段相同，引物长度为15-40bp；另一条引物和乳酸乳球菌的特异性分子标记的序列互补，引物长度为15-40bp，该引物对扩增片段长度为200-1383bp。

进一步，本发明所提供的引物对，还可以具有这样的特征，一条引物的序列如SEQ ID NO.2所示，另一条引物的序列如SEQ ID NO.3所示。

本发明的又一个目的在于提供一种检测乳酸乳球菌的试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括上述目的中所提供的引物。

进一步，本发明所提供的检测乳酸乳球菌的试剂盒，还可以具有这样的特征：试剂盒还包括dNTP，10×PCR缓冲液和Taq DNA聚合酶。

本发明再一个目的在于提供一种乳酸乳球菌的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，提取待测样品菌株中的质粒DNA；

步骤二，以步骤一所得质粒DNA为模板，以上述目的中所提供的引物对进行PCR反应；

步骤三，将步骤二所得PCR反应产物进行电泳检测，检测是否存在上述目的中提供的引物对所扩增出的片段。

另外，本发明所提供的乳酸乳球菌的检测方法，还可以具有这样的特征：其中，上述步骤二中的PCR反应体系包括0.5mmol/L的上游引物，0.5mmol/L的下游引物，0.2mmol/L的dNTP，1×PCR buffer，1.5mmol/L的Mg²⁺，0.02U/μL的Taq DNA聚合酶，1.0-2.0ng/μL的DNA模板。

另外，本发明所提供的乳酸乳球菌的检测方法，还可以具有这样的特征：其中，步骤二中的PCR反应的反应程序依次为，95℃，3min；95℃下45s,55℃下45s,72℃下1min，进行30个循环；72℃，5min；4℃保存。

本发明的再一个目的在于提供一种上述特异性标记分子作为乳酸乳球菌的特征序列在检测乳酸乳球菌中的应用。

发明作用与效果

本发明所提供的特异性检测乳酸乳球菌的引物及其检测方法和试剂盒，具有如下优点：

1.检测速度快、特异性高