[发明专利]一种测定豆豉中大豆异黄酮类成分含量的测定与分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定豆豉中大豆异黄酮类成分含量的测定与分析方法，属于生物医药技术领域。

背景技术

我国食用黄豆已有５千年历史，研究发现，食用黄豆对许多疾病，尤其是老年性疾病具有治疗或保健作用，豆豉是我国具有民族特色的传统大豆发酵制品，一直以其营养丰富、风味独特在世界饮食文化中具有特殊的地位。豆豉不仅营养价值高，而且可入药，中医历代医书中都有豆豉治疗疾病的记载，汉代张仲景的《伤寒论》中即有“桅子豉汤”，方中用桅子、豆豉煎汤治疗外感风寒、不思饮食等症；李时珍的《本草纲目》中则有“豆豉开胃增食、消食化滞、发汗解表、除烦喘等疗效”的记载，近年来，大豆及大豆制品的生物活性物质和保健作用逐渐成为研究的热点，其中异黄酮是一类重要的生理活性物质，具有多种生理功能，如降低血糖浓度调节脂代谢、抗肿瘤作用、对血管的防护作用、雌激素双向调节作用、预防骨质疏松症、较强的抗氧化活性和抗真菌活性等。黄豆中含有异黄酮，分为游离型的苷元（ａｇｌｙｃｏｎ）和结合型的糖苷（ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）两类，大豆发酵后苷转变为苷元，而大豆苷元和染料木素是２种含量较高的苷元成分。

发明内容

本发明的目的是：提供一种测定豆豉中大豆异黄酮类成分含量的测定与分析方法，以提供一种新的检测手段达到快速检测大豆异黄酮类成分含量，以克服现有技术的不足。

本发明的技术方案

一种测定豆豉中大豆异黄酮类成分含量的测定与分析方法，该方法采用反向液相色谱法测定豆豉中大豆苷元和染料木素的含量，并对黄豆和发酵后的豆豉进行了比较。

前述的一种测定豆豉中大豆异黄酮类成分含量的测定与分析方法中，在所述反向液相色谱法测定中采用乙腈－０.２％磷酸系统实现分离，同时采用表明７０％乙醇超声提取３０ｍｉｎ。

由于采用上述技术方案，与现有技术相比，本发明的测定与分析方法原理简单，操作方便，尤其验考察了甲醇－水系统、甲醇－０.２％磷酸系统、乙腈－水系统、乙腈－０.４％磷酸系统和乙腈－０.２％磷酸系统等流动相，结果表明乙腈－０.２％磷酸（３６∶６４）分离效果最好,在供试品的制备方法中，对无水乙醇、８０％乙醇、７５％乙醇、７０％乙醇、６５％乙醇、５０％乙醇、３０％乙醇超声提取进行考察,结果表明７０％乙醇超声提取３０ｍｉｎ效果最好,溶剂空白显示对测定结果无影响，方法专属性强，方法简单易行。

附图说明

附图1为对照组的黄酮含量色谱图；

附图2为豆鼓的黄酮含量色谱图；

附图3为黄豆的黄酮含量色谱图；

附图4为大豆苷元加样回收率结果统计图；

附图5为　染料木素加样回收率显示图；

附图6为３批黄豆及发酵后豆豉中异黄酮含量统计图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明作进一步的详细说明，但不作为对本发明的任何限制。

本发明的实施例：

１　材料

Ａｇｉｌｅｎｔ１１００系列高效液相色谱仪，ＳＧ８２００Ｈ超声仪（上海冠特超声仪器有限公司）；豆豉由本实验室自行分离的菌种发酵制得，黄豆购于超市；大豆苷元对照品（中国药品生物制品检定所，批号１１１５０２－２００１０１）及染料木素对照品（中国药品生物制品检定所，批号１１１７０４－２００５０１）；乙腈为色谱纯，水为纯净水，其余试剂为分析纯。

２　方法和结果

２.１　色谱条件

色谱柱ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ_１８（２５０ ｍｍ ×４.６ ｍｍ，５μｍ），保护柱ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＣ_１８（４.６ｍｍ×３ｍｍ，５μｍ），流动相乙腈－０.２％磷酸（３６∶６４），流速为１.０ｍｌ／ｍｉｎ，柱温３０℃，检测波长２６０ｎｍ,在此条件下能同时检测染料木素和大豆苷元并产生较好分离且空白无干扰。

２.２　溶液制备

精密称取染料木素对照品２４.９１ｍｇ，加无水乙醇定容至２５ｍｌ为贮备液一；精密称取大豆苷元对照品２４.３１ｍｇ用无水乙醇定容至２５ｍｌ作为贮备液二，精密吸取贮备液一和贮备液二各１ｍｌ，用无水乙醇稀释至１００ｍｌ作为对照品溶液，其中含染料木素为９.９６４ｍｇ／Ｌ，大豆苷元为９.７２４ｍｇ／Ｌ,分别将豆豉、黄豆粉碎，称取粉末各１ｇ，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入７０％乙醇２５ｍｌ，密塞，称定重量，超声处理３０ｍｉｎ，放冷，用７０％乙醇补足减失的重量，摇匀过滤，取续滤液过０.４５μｍ微孔滤膜，即得供试品溶液。

２.３　取上述各种溶液各２０μｌ按２.１项下的色谱