[发明专利]磁性纳米颗粒固定化氨基酰化酶的制备及其产品和应用

权利要求书

1.一种磁性纳米颗粒固定化氨基酰化酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备四氧化三铁纳米颗粒；

(2)将四氧化三铁纳米颗粒超声分散后，在氮气保护下，与3-氨丙基三乙氧基硅烷反应，制备氨基修饰的四氧化三铁纳米颗粒；

(3)将氨基修饰的四氧化三铁纳米颗粒与氨基酰化酶溶液混合反应，得到磁性纳米颗粒固定化氨基酰化酶。

2.根据权利要求1所述的一种磁性纳米颗粒固定化氨基酰化酶的制备方法，其特征在于，步骤(2)中制备氨基修饰的四氧化三铁纳米颗粒的方法为：

将四氧化三铁纳米颗粒超声分散到乙醇中，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，氮气保护，30-50℃机械搅拌18-36h，磁铁收集氨基修饰的四氧化三铁纳米颗粒，然后用去离子水和无水乙醇洗涤，50-70℃真空干燥，密封保存备用。

3.根据权利要求2所述的一种磁性纳米颗粒固定化氨基酰化酶的制备方法，其特征在于，四氧化三铁纳米颗粒与3-氨丙基三乙氧基硅烷的摩尔比为2∶1-4∶1。

4.根据权利要求1所述的一种磁性纳米颗粒固定化氨基酰化酶的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，制备磁性纳米颗粒固定化氨基酰化酶的方法如下：

(1)将氨基修饰的四氧化三铁纳米颗粒溶于磷酸缓冲液，使其终浓度为2～8mg/ml，超声后，加入戊二醛，使戊二醛体积分数达到1.0％，25-40℃搅拌8-24h，磁铁收集，用相同的磷酸缓冲液洗涤纳米颗粒除去残留的戊二醛，得到中间纳米颗粒；

(2)将收集的中间纳米颗粒与氨基酰化酶溶液混合1-2.5h，磁铁收集后用相同的磷酸缓冲液洗涤以除去残留的游离酶，得到磁性纳米颗粒固定化氨基酰化酶。

5.根据权利要求4所述的一种磁性纳米颗粒固定化氨基酰化酶的制备方法，其特征在于，所述的中间纳米颗粒与氨基酰化酶的摩尔比为2∶1-3∶1。

6.根据权利要求4所述的一种磁性纳米颗粒固定化氨基酰化酶的制备方法，其特征在于，所述的磷酸缓冲液的浓度为0.1mol/L，pH为6.5-7.0。

7.一种由权利要求1所述的制备方法制得的磁性纳米颗粒固定化氨基酰化酶。

8.一种如权利要求7所述的磁性纳米颗粒固定化氨基酰化酶的应用，其特征在于，所述的磁性纳米颗粒固定化氨基酰化酶用于拆分茶氨酸。

9.根据权利要求8所述的一种磁性纳米颗粒固定化氨基酰化酶的应用，其特征在于，所述的应用包括以下步骤：

将茶氨酸加入到磷酸缓冲液的体系中42℃保温5min，然后加入磁性纳米颗粒固定化氨基酰化酶，振荡反应30min，立即沸水浴5min终止反应。

10.根据权利要求9所述的一种磁性纳米颗粒固定化氨基酰化酶的应用，其特征在于，所述的茶氨酸在磷酸缓冲液中的浓度为0.02mol/L，磁性纳米颗粒固定化氨基酰化酶与茶氨酸的比为1.5U∶1μmol-3U∶1μmol，所述的磷酸缓冲液的浓度为0.1mol/L，pH为6.5-7.0。