[发明专利]一种细菌多糖修饰的重组融合蛋白的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种细菌多糖修饰的重组融合蛋白的制备方法，是将重组融合蛋白和脑膜炎奈瑟球菌O-寡糖转移酶PglL在O-抗原连接酶基因缺陷的细菌中共表达，脑膜炎奈瑟球菌O-寡糖转移酶PglL将细菌自身的多糖连接到所述重组融合蛋白上，得到所述细菌多糖修饰的重组融合蛋白；

所述重组融合蛋白含有N端信号肽、具有脑膜炎奈瑟球菌O-寡糖转移酶PglL的糖基化位点的肽段和载体蛋白序列；

所述O-抗原连接酶基因缺陷的细菌为O-抗原连接酶基因缺陷的福氏志贺氏菌、O-抗原连接酶基因缺陷的甲型副伤寒沙门氏菌；

所述载体蛋白为细菌毒素蛋白的无毒突变体或细菌毒素蛋白的部分片段；

所述细菌毒素蛋白的无毒突变体为绿脓杆菌外毒素蛋白A无毒突变体；

所述细菌毒素蛋白的部分片段为霍乱毒素B亚单位或破伤风毒素C蛋白；

所述具有脑膜炎奈瑟球菌O-寡糖转移酶PglL的糖基化位点的肽段为含有脑膜炎奈瑟球菌菌毛蛋白PilE的自N端起第55位至第66位的任意肽段。

2.一种细菌多糖修饰的重组融合蛋白的制备方法，是将重组融合蛋白、脑膜炎奈瑟球菌O-寡糖转移酶PglL和外源多糖合成基因簇在O-抗原连接酶基因缺陷和O-抗原合成基因缺陷的细菌中共表达，脑膜炎奈瑟球菌O-寡糖转移酶PglL将外源多糖连接到所述重组融合蛋白上，得到所述细菌多糖修饰的重组融合蛋白；

所述重组融合蛋白含有N端信号肽、具有脑膜炎奈瑟球菌O-寡糖转移酶PglL的糖基化位点的肽段和载体蛋白序列；

所述O-抗原连接酶基因缺陷和O-抗原合成基因缺陷的细菌为O-抗原连接酶基因缺陷和O-抗原合成基因缺陷的大肠杆菌；

所述载体蛋白为细菌毒素蛋白的无毒突变体或细菌毒素蛋白的部分片段；

所述细菌毒素蛋白的无毒突变体为绿脓杆菌外毒素蛋白A无毒突变体；

所述细菌毒素蛋白的部分片段为霍乱毒素B亚单位或破伤风毒素C蛋白；

所述具有脑膜炎奈瑟球菌O-寡糖转移酶PglL的糖基化位点的肽段为含有脑膜炎奈瑟球菌菌毛蛋白PilE的自N端起第55位至第66位的任意肽段。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述含有脑膜炎奈瑟球菌菌毛蛋白PilE的自N端起第55至第66位的任意肽段为如下任一所示的肽段：

（1）SEQ ID No.32中自N端起第128位至第156位氨基酸所示的肽段或其串联重复序列；

（2）SEQ ID No.34中自N端起第128位至第154位氨基酸所示的肽段或其串联重复序列；

（3）SEQ ID No.36中自N端起第128位至第152位氨基酸所示的肽段或其串联重复序列；

（4）SEQ ID No.38中自N端起第128位至第150位氨基酸所示的肽段或其串联重复序列；

（5）SEQ ID No.40中自N端起第128位至第149位氨基酸所示的肽段或其串联重复序列；

（6）SEQ ID No.48中自N端起第22位至第40位氨基酸所示的肽段或其串联重复序列；

（7）SEQ ID No.50中自N端起第22位至第36位氨基酸所示的肽段或其串联重复序列；

（8）SEQ ID No.52中自N端起第22位至第33位氨基酸所示的肽段或其串联重复序列。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述绿脓杆菌外毒素A无毒突变体的氨基酸序列如SEQ ID No.46中自N端起第20位至第631位所示；

所述霍乱毒素B亚单位的氨基酸序列如SEQ ID No.32中自N端起第20位至第122位所示；

所述破伤风毒素C蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.60中自N端起第20位至第455位所示。