[发明专利]阿法替尼及其异构体的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及阿法替尼及其异构体杂质的一种HPLC分离检测方法，属于制药技术领域。

背景技术

阿法替尼(Afatinib)，化学名为(2E)-4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-6-{[4-(N,N-二甲基氨基)-1-氧代-2-丁烯-1-基]氨基}-7-((3S)-四氢呋喃-3-基氧基)-喹唑啉；是表皮生长因子受体(EGFR)和人表皮生长因子受体2(HER2)酪氨酸激酶的不可逆抑制剂，其二马来酸盐已经被批准用于治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)等疾病，阿法替尼结构如式(1)所示：

阿法替尼结构中存在一个手性碳，具有一个对映异构体杂质，在检测阿法替尼过程中，阿法替尼与其对映异构体杂质难以分离、检测。

发明内容

发明概述

本发明提供了一种简便、有效的HPLC分离检测阿法替尼、其对映异构体杂质的方法。

本发明人通过多次试验尝试，通过筛选色谱柱和相适应的流动相、流速、柱温等检测条件，得到一种适用于阿法替尼、其对映异构体杂质的分离检测方法，所述方法采用CHIRALPAK OZ-H，250mmX4.6mm，5μm，手性色谱柱，为分离色谱柱；以正已烷、乙醇、甲醇、二乙胺混合溶液为流动相；可以将阿法替尼及其对映异构体杂质进行有效分离检测。

术语定义

术语“分离度”是指HPLC检测中，相邻色谱峰保留时间之差与两色谱峰峰宽均值之比。

发明详述

发明人通过研究，开发了一种分离检测阿法替尼、其对映异构体杂质的方法，方法包括：在高效液相色谱仪上进行，色谱柱为CHIRALPAK OZ-H，250mmX4.6mm，5μm手性色谱柱；流动相为正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺混合溶液，且混合溶剂中，甲醇和二乙胺体积比为100:0.1，正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的体积比为550-650:350-250:100:0.1；柱温为15℃-35℃；流速为0.5mL/min-1.0mL/min。

发明人曾尝试使用CHIRALPAK AS-H，4.6mmX250mm,5μm手性色谱柱；IC，4.6mmX250mm,5μm，手性色谱柱；OD-H，4.6mmX250mm,5μm手性色谱柱；OJ-H，4.6mmX250mm,5μm手性色谱柱等为分析色谱柱；使用相同流动相对供试品进行分析检测，结果显示上述色谱柱对供试品中的依鲁替尼及其对应异构体的分离效果较差，分离度低，在调节流动相比例亦不能很好的改善分离度和灵敏度；而CHIRALPAK OZ-H，250mmX4.6mm,5μm手性色谱柱的分离效果较好。

在检测过程中，可以使用流动相或乙醇为稀释溶剂。

所述检测方法中，可以使用的检测器有紫外检测器。

所述检测方法中，检测的样品的进样量为0.1μL-20μL。在一些实施方式中，检测的样品的进样量为2μL-10μL。在一些实施方式中，检测的样品的进样量为5μL。

所述检测方法中，检测运行时间可以是15min-20min。

在一些实施方式中，流动相为正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺混合溶液，且正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的体积比为550:350:100:0.1。在一实施例中，流动相中，正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的体积比为600:300:100:0.1。

在一些实施方式中，检测波长为256nm。

在一些实施例中，所述流动相的流速为0.7mL/min。

在一些实施例中，所述柱温为30℃。

在一些实施例中，一种分离检测阿法替尼、其对映异构体杂质的方法包括：在高效液相色谱仪上进行，检测器是紫外检测器，检测波长为256nm；色谱柱是CHIRALPAK OZ-H，250mmX4.6mm,5μm手性色谱柱；流动相为正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺混合溶液，且正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的体积比为600:300:100:0.1；流速为0.6mL/min-0.8mL/min；柱温为25℃-35℃。

在一些实施例中，一种分离检测阿法替尼、其对映异构体杂质的方法包括：在高效液相色谱仪上进行，检测器是紫外检测器，检测波长为256nm；色谱柱是CHIRALPAK OZ-H，250mmX4.6mm,5μm手性色谱柱；流动相为正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺混合溶液，且正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的体积比为600:300:100:0.1；流速为0.7mL/min；进样量为5μL；柱温为30℃；运行时间为20min。