[发明专利]一种原位形成拉曼增强基底检测水中大肠杆菌的方法有效
| 申请号： | 201410687082.1 | 申请日： | 2014-11-26 |
| 公开（公告）号： | CN104330399A | 公开（公告）日： | 2015-02-04 |
| 发明（设计）人： | 陈章;李会东;李志贤;陈国梁 | 申请（专利权）人： | 湖南科技大学 |
| 主分类号： | G01N21/65 | 分类号： | G01N21/65 |
| 代理公司： | 张家界市慧诚商标专利事务所 43209 | 代理人： | 高红旺 |
| 地址： | 411201 湖南省湘*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 原位 形成 增强 基底 检测 水中 大肠杆菌 方法 | ||
1. 一种原位形成拉曼增强基底检测水中大肠杆菌的方法，其特征在于，其步骤如下：
（1）选择检测大肠杆菌：使用LB培养基培养，37℃条件下培养过夜，取细菌培养液，4000rpm/min离心5min，去除培养基，使用pH7.4 PBS缓冲液重悬菌体，稀释菌体，等待检测；
（2）原位形成拉曼增强基底：修饰有1μg/mL-10μg/mL葡萄糖氧化酶和0.1μg/mL-20μg/mL抗大肠杆菌抗体的0.1μg/mL-1μg/mL氧化石墨烯与大肠杆菌结合，2000rpm/min-3000rpm/min离心5min，收集菌体，pH7.4 PBS缓冲液重悬；加入0.5μg/mL-50μg/mL银纳米种子，氧化石墨烯表面的葡萄糖氧化酶催化1μg/mL-50μg/mL葡萄糖，生成过氧化氢；过氧化氢与10μg/mL-50μg/mL银离子反应，促进银纳米种子生长，形成银纳米颗粒，并吸附到氧化石墨烯表面，原位形成拉曼增强基底；2000rpm/min-3000rpm/min离心5min，收集菌体，pH7.4 PBS缓冲液重悬；
（3）加入10μg/mL-20μg/mL拉曼报告分子，反应10min， 2000rpm/min-3000rpm/min离心5min，收集菌体，使用pH7.4 PBS缓冲液清洗菌体，2000rpm/min-3000rpm/min离心5min收集菌体，使用激光拉曼仪检测拉曼报告分子的拉曼增强信号，拉曼信号强度与大肠杆菌浓度成正相关性，以此实现对水中大肠杆菌的信号放大检测。
2.根据权利1所述的方法，其特征是，所述的拉曼报告分子为罗丹明B。
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