[发明专利]一种生产乙醇酸基聚合物的重组菌及其应用

权利要求书

1.一种重组菌，是将聚羟基脂肪酸酯颗粒结合蛋白基因phaP、PHB生物合成操纵子phbCAB、辅酶A转移酶基因pct、异柠檬酸裂解酶基因aceA、异柠檬酸脱氢酶激酶基因aceK和乙醛酸还原酶基因ghrA导入宿主大肠杆菌得到的。

2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述大肠杆菌为E.coli JM109或E.coliJM109 ldhA；

所述E.coli JM109 ldhA是E.coli JM109缺失ldhA基因后的菌。

3.根据权利要求2所述的重组菌，其特征在于，所述大肠杆菌E.coli JM109 ldhA的构建方法包括如下步骤：

(1)制备如SEQ ID No.3所示的DNA片段；

(2)将质粒pKD46转化至E.coli JM109中，得到E.coli JM109(pKD46)；

(3)诱导所述E.coli JM109(pKD46)菌株中的Red重组系统表达，再将所述DNA片段转入所述E.coli JM109(pKD46)菌株中，经过重组，得到ldhA基因被Kan基因替换的重组菌，记作E.coli JM109 ldhA-K(pKD46)；

(4)去除所述E.coli JM109 ldhA-K(pKD46)菌株中的质粒pKD46，得到的重组菌记作E.coli JM109 ldhA-K；

(5)将质粒pCP20转化至E.coli JM109 ldhA-K菌株中，去除Kan基因，得到的重组菌记作E.coli JM109 ldhA。

4.根据权利要求1-3任一所述的重组菌，其特征在于，所述将聚羟基脂肪酸酯颗粒结合蛋白基因phaP、PHB生物合成操纵子phbCAB、辅酶A转移酶基因pct、异柠檬酸裂解酶基因aceA、异柠檬酸脱氢酶激酶基因aceK和乙醛酸还原酶基因ghrA导入宿主大肠杆菌的方法具体是通过表达盒1和表达盒2导入宿主大肠杆菌；

所述表达盒1是启动子序列、聚羟基脂肪酸酯颗粒结合蛋白基因phaP和PHB生物合成操纵子phbCAB依次连接得到的；

所述表达盒2是启动子序列、辅酶A转移酶基因pct、乙醛酸还原酶基因ghrA、异柠檬酸裂解酶基因aceA和异柠檬酸脱氢酶激酶基因aceK依次连接得到的。

5.根据权利要求4所述的重组菌，其特征在于，所述表达盒1的序列如SEQ ID No.1所示；所述表达盒2的序列如SEQ ID No.2所示；

所述聚羟基脂肪酸酯颗粒结合蛋白基因phaP的序列如SEQ ID No.1中第72-650位核苷酸分子所示；

所述PHB生物合成操纵子phbCAB的序列如SEQ ID No.1中第682-4395位核苷酸分子所示；

所述辅酶A转移酶基因pct的序列如SEQ ID No.2中第72-1625位核苷酸分子所示；

所述乙醛酸还原酶基因ghrA的序列如SEQ ID No.2中第1655-2593位核苷酸分子所示；

所述异柠檬酸裂解酶基因aceA的序列如SEQ ID No.2中第2623-3927位核苷酸分子所示；

所述异柠檬酸脱氢酶激酶基因aceK的序列如SEQ ID No.2中第4110-5826位核苷酸分子所示；

所述启动子序列如SEQ ID No.1中第13-55位核苷酸分子所示或SEQ ID No.2中第13-55位核苷酸分子所示；

所述ldhA基因的序列如SEQ ID No.4中所示。

6.权利要求1-5任一所述的重组菌在生产乙醇酸基聚合物中的应用。

7.一种生产乙醇酸基聚合物的方法，包括如下步骤：以大肠杆菌可以利用的单糖为底物，发酵培养权利要求1-5任一所述的重组菌，得到乙醇酸基聚合物。