[发明专利]一种用于香水椰子种苗纯度的鉴定的特异SSR引物及鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及香水椰子种苗栽培技术领域，特别是指一种用于香水椰子种苗纯度的鉴定的特异SSR引物及鉴定方法。

背景技术

香水椰子是近年从泰国引进的椰子优良新品种，其主要特点是椰肉和椰汁具有一种用嗅觉可以闻到的糯米香味，香味明显的植株其叶片用手指揉搓后也可闻到淡淡的糯米香味，极受消费者青睐。同时香水椰子产量高，投产早，鲜果市场价值高，经济价值远远高于海南本地的椰子品种。

香水椰子授粉形式主要为自花授粉，但也存在风媒虫媒等介质的传粉。只要是自花授粉后，结出的椰果都会具有同母本一样的香味；但是一旦风媒、虫媒等介质带来其它品种的花粉，经授粉后结出的椰果就不再具有香味，但椰果在外观上同具有香味的椰果没有区别。这种不具有香味的椰果成熟后如用于育苗，其后代不再具有香味，但其外观性状同具有香味的种苗没有区别，无法用肉眼人为地剔除不纯的种苗。这种不纯的种苗如用于生产，从种植到结果大约四年时间都无法从外观鉴定出来，必须到结果后方可从椰果有或无香味进行鉴定。这样，势必造成大量的人力、物力和财力的浪费。同时，由于出圃种苗纯度得不到保证，严重影响广大种植者对香水椰子的认可和种植的积极性，进而影响香水椰子大面积推广工作的进行。

发明内容

本发明提出了一种用于香水椰子种苗纯度的鉴定的特异SSR引物及鉴定方法，能够在香水椰子苗期对种苗进行鉴定，将能够结出香味椰果的香水椰子种苗鉴定出来。

本发明的技术方案是这样实现的

一种用于香水椰子种苗纯度的鉴定的特异SSR引物序列为，左引物序列为(5'to3')TGAAAACAAAAGATAGATGTCAG，右引物序列为(5'to3')GAAGATGCTTTGATATGGAAC。

一种香水椰子种苗纯度的鉴定方法，包括以下步骤：

(1)香水椰子种苗叶片DNA的提取；

(2)利用特异SSR引物进行PCR扩增；

(3)PCR扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离条带；

(4)步骤(3)所得的电泳凝胶进行染色，拍照，即可根据条带情况将具有香味的香水椰子种苗鉴定出来。

进一步，所述步骤(1)香水椰子种苗叶片DNA提取采用改良的CTAB法。

进一步，步骤(1)所述改良的CTAB法，具体操作为：在提取缓冲液和裂解缓冲液中同时加入PVP40和β-巯基乙醇，在提取过程中，利用氯仿-异戊醇进行2-3次抽提。

进一步，所述步骤(2)PCR扩增程序为94-96℃预变性1-3min进入扩增循环；94-96℃变性20-40s，50-60℃退火40-50s，70-75℃延伸1min；重复循环25-35次，72℃延伸5-10min。

进一步，所述步骤(4)染色用试剂为硝酸银。

进一步，所述步骤(4)电泳凝胶上条带显示为2条的香水椰子种苗所结的椰果具有香味，电泳凝胶上条带显示为3条的香水椰子种苗所结的椰果不具有香味。

本发明的有益效果：

椰子树从育苗到结出椰果需要3-4年时间，而传统的育苗方法需要等到椰子结果才能将结出香味椰果的椰子植株挑选出来。自然条件下，如果不经过鉴定直接将种苗栽培，约有四分之一的种苗无法结出香味椰果。不能结出香味椰果的椰子树经济效益低，栽培过程中同样需要花费大量的人力、物力和财力，如 果等到结果才发现不能结出香味椰果，无形中造成了种植户经济上的损失。香水椰子种苗纯度不高，也会挫伤广大种植户的积极性，阻碍了香水椰子的大面积推广。本发明采用SSR分子标记技术对香水椰子种苗进行纯度鉴定，可以在种苗期将能够结出香味椰果的香水椰子种苗和不能结出香味椰果的香水椰子种苗区分开来，无需等到椰子树结果之后再区分，能够保证出圃的香水椰子的种苗纯度，避免了在椰子树栽培过程中大量的人力、物力和财力的浪费，具有重大的经济意义。同时，香水椰子种苗纯度的提高，能够极大地调动了种植户的积极性，对香水椰子的推广具有显著的促进作用。

附图说明

图1本发明实施例1聚丙烯酰胺凝胶电泳图，编号1-10、13和14为椰果带有香味的香水椰子种苗；12和15-23为椰果不带香味的香水椰子种苗；11为marker。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1