[发明专利]苯妥因均相酶免疫检测试剂盒及其多克隆抗体的制备方法

权利要求书

1.一种苯妥因免疫原，其通过苯妥因衍生物与载体偶联获得，其结构式如式I所示：

式I

式中，R为连接基团，载体为血清蛋白，血蓝蛋白或甲状腺球蛋白。

2.根据权利要求1所述的苯妥因免疫原，其特征在于，R选自如下基团：-(CH₂)_n-COO-、-O-(CH₂)_n-COO-、-S-(CH₂)_n-COO- 或-O-(CH₂)_n-NH-COO- 等，n是1至20之间的整数。

3. 根据权利要求2所述的苯妥因免疫原，其特征在于，R优选为-O-CH₂-NH-COO-。

4.一种抗苯妥因特异性多克隆抗体，其由权利要求1所述的苯妥因免疫原免疫宿主动物后生产而得到的，具体步骤如下：

步骤a：

苯妥因衍生物的活化：将苯妥因衍生物置于容器中，并依次加入纯二甲基酰胺、无水乙醇、10 mM pH为 5.0 的磷酸钾缓冲液、1-乙基-3-(-3-二甲氨丙基)碳二亚胺和N-羟基硫代琥珀酰亚胺，搅拌溶解反应30分钟；

步骤b：抗原的偶联和纯化：将牛血清白蛋白、血蓝蛋白或甲状腺球蛋白溶解于10mL0.2 M pH为 8.5的磷酸缓冲液中得到溶液A，将步骤a活化的苯妥因衍生物滴加到所得的溶液A中，在2～8℃条件下搅拌12 -16小时，得到偶联的苯妥因抗原，将得到的偶联的苯妥因抗原进行透析纯化，得到苯妥因免疫抗原；

步骤c：采用步骤b得到的苯妥因免疫抗原免疫动物，得到苯妥因特异性多克隆抗体。

5.一种苯妥因均相酶免疫检测试剂盒，所述苯妥因均相酶免疫检测试剂盒上设置有R1试剂、R2试剂、定标液。

6.根据权利要求5所述的免疫检测试剂盒，其特征在于，

所述R1试剂由以下组分组成：质量百分比为0.02-0.1%的苯妥因特异性多克隆抗体，55 mM/L 的Tris，质量体积百分比为0.1%的牛血清白蛋白，145.4 mM/L 的NaCl，3 mM/L的MgCl₂，2.02 g/L脱氢辅酶Ⅰ和0.86 g/L葡萄糖-6-磷酸，余量为水，pH值为8.0。

7.所述R2试剂为质量体积比为0.03-0.25%的葡糖糖六磷酸脱氢酶苯妥因偶联物酶标抗原的Tris缓冲液，所述Tris缓冲液pH为8.2，所述Tris缓冲液中各组分浓度为120 mM Tris、质量体积百分比为0.1%的牛血清白蛋白、145.4 mM NaCl、3 mM MgCl₂；

定标液为含有不同浓度苯妥因的空白血清。