[发明专利]一种酶解法提取陈皮中橙皮苷的方法

说明书

技术领域

本发明提供一种酶解法提取橙皮苷的方法，涉及医药领域。

背景技术

橙皮苷具有降低血管脆性，降血压、抗过敏、抑制肿瘤等作用，在临床上用于心血管系统疾病的辅助治疗，也可用于医药工业中制药的原料，橙皮苷还作为天然抗氧化剂用于食品和化妆品行业。

传统从柑橘皮中提取橙皮苷通常采用热水提取、醇回流提取、碱提酸沉等方法。这些方法都是采用化学溶剂浸润溶解药材中的有效成分，虽然简单易操作，但存在提取不完全、造成一些橙皮苷残留在果渣里，使用的化学试剂易造成环境污染等缺点。近年来报道微波和超声波辅助提取橙皮苷。虽然这两种方法提取时间短，但超声法噪音很大，微波法有辐射，它们对提取设备有很高的要求，这在一定程度上限制了其在企业大生产中的应用。

柑橘、柠檬、柚子等果皮中约含30％果胶，果胶主要存在于植物的细胞壁和细胞内层，由于果胶阻碍了细胞内橙皮苷等有效成分的溶出，采用果胶酶可以酶解果胶，使橙皮苷充分地溶解出来，从而明显提高橙皮苷的提取率。

与传统方法如醇溶剂回流提取法相比，酶解法提取橙皮苷具有容易过滤，操作简单，无有机溶剂残留，不造成环境污染的优点。与超声提取法、微波提取法相比，它有无需特殊设备、生产安全性好、有利于劳动保护及有利于企业大生产等优点。

发明内容

一种酶解法提取陈皮中橙皮苷的方法，其特征是：称取陈皮药材粗粉适量，按照料液比为1∶8～40(g/mL)的比例加入蒸馏水，按照用量为药材质量的0～3％加入果胶酶，其用量为药材质量的0～3％，用稀盐酸将药液的pH值调节至3～5，置于40～55℃恒温水浴中0～3小时，取出，过滤，滤液浓缩至浸膏，然后置于真空干燥箱中干燥成粉末，即得橙皮苷提取物。

具体实施方式

下面结合实施实例，对本发明进一步描述，但其不代表为本发明的唯一实施方式。

实施实例一 

1.橙皮苷的提取：

将陈皮药材粉粹成粗粉，称取100.00g，加入300mL蒸馏水，加入果胶酶(300000U/g)，用量为药材质量的0.3％，用稀盐酸调节溶液的pH值为3，置于45℃恒温水浴箱中酶解2小时，取出，过滤，滤液浓缩至浸膏，然后置于真空于燥箱中干燥成粉末，即得橙皮苷提取物。

2.提取物中橙皮苷的含量测定

采用HPLC法测定，测定方法是参考2010年版《中国药典》陈皮药材中橙皮苷的含量测得方法。

(1)标准溶液的配制精确称取橙皮苷标准品10.1mg，加入适量甲醇，超声溶解，用甲醇定容到25mL，配制成质量浓度为0.404mg/mL的橙皮苷标准品溶液。

(2)检测波长的确定以空白溶剂甲醇为参比溶液，通过紫外可见分光光度计对橙皮苷标准溶液在200～400nm波长间扫描，同时，对陈皮样品溶液也进行光谱扫描。结果显示，橙皮苷标准溶液和陈皮样品液都在285nm处有强吸收峰，因此取283nm为检测波长。

(3)HPLC色谱条件色谱柱：Waters Symmetry C18(250mm×4.6mm，5μm)，流动相：甲醇-2％冰醋酸溶液(34∶66)，流速：0.5mL/min，检测波长：283nm，温度为室温。进样量：20μL。橙皮苷保留时间为5.1min。

(4)标准曲线的制备

分别精密吸取橙皮苷标准溶液1、2、3、4、5mL于10mL的容量瓶中，用甲醇定容，配成质量浓度分别为40.4、80.8、121.2、161.6、202μg/mL的一系列标准溶液，进行HPLC测定，在283nm波长处测峰面积。以橙皮苷标准溶液的浓度(μg/mL)为横坐标，以其峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为y＝185220x-25642，R²＝0.999，其中y表示峰面积，x表示橙皮苷的浓度。线性范围为40.4～202μg/mL。

(5)橙皮苷提取率的测定

提取所得溶液，用0.45μm微孔滤膜过滤，通过HPLC测其峰面积。通过回归方程计算样品中橙皮苷的含量。实验重复三次，求平均值，测得橙皮苷提取物中橙皮苷有5.58g，则橙皮苷的提取率为5.58％。

实施实例二 

1.橙皮苷的提取：

称取陈皮药材药材粗粉100g，加入200mL蒸馏水，加入果胶酶(30000U/g)，用量为药材质量的3％，用稀盐酸调节溶液的pH值为4，置于45℃恒温水浴箱中酶解1.5小时，取出，过滤，滤液浓缩至浸膏，然后置于真空干燥箱中干燥成粉末，即得橙皮苷提取物。

2.橙皮苷提取率的测定

根据以上的HPLC法测定，测得橙皮苷提取物中橙皮苷有5.02g，则橙皮苷的提取率为5.02％。