[发明专利]用于原发性肝细胞癌治疗方案选择和/或预后评估的检测PBLD基因表达的引物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种引物，尤其涉及用于原发性肝细胞癌治疗方案选择和/或预后评估的检测PBLD基因表达的引物，本发明还涉及该引物的应用。

背景技术

人类PBLD基因全长2575bp，位于人类10号染色体上，广泛表达于脑、心脏、肺、肝、胰腺等组织中。目前，在肝癌基因表达谱的基因组学研究中发现PBLD的表达较癌旁正常肝组织降低或者缺失。但是，PBLD在肝癌组织中的这种异常表达在临床预后中的意义未见报道。原发性肝癌(Primary hepatocellular carcinoma, HCC)是目前人类最常见的恶性肿瘤之一， 具有恶性程度高，易转移复发等特点。肝癌是全球第六大高发肿瘤和第三大致死肿瘤，每年有约 75 万的新发病例和接近 70 万的死亡病例。在全世界的新发病例中，中国所占比例高达55%，居中国恶性肿瘤死亡率的第 2 位。

由于HCC发病隐匿，只有10%~15%的患者在发现时可进行手术治疗，而且，即使经过手术切除，其复发率也较高。因此，肝癌预后不良，目前尚缺乏较为有效的治疗手段。

目前，临床还没有高效、特异的分子标志物可对肝癌的预后进行判断。而早期判断肝癌患者预后可指导临床医生对患者进行个体化治疗，提高肝癌患者生存率。因此，寻找影响肝癌患者预后的指标对改善患者预后意义重大。

发明内容

本发明的目的之一在于提供用于原发性肝细胞癌治疗方案选择和/或预后评估的检测PBLD基因表达的引物。

发明人通过实时荧光定量PCR技术检测了108例肝癌患者肝癌组织中PBLD mRNA水平的表达情况，并与其相应的癌旁正常肝组织进行了对比，同时，按照PBLD mRNA表达水平将肝癌患者分为PBLD高表达组及PBLD低表达组。将所得结果与肝癌患者临床特征、生存及复发时间进行结合，分析PBLD在肝癌组织中的表达谱特点及不同表达水平的PBLD对肝癌患者预后的影响。研究发现，PBLD在肝癌组织中的表达水平较癌旁正常肝组织明显降低，其表达水平与患者生存时间及复发显著相关：在PBLD高表达组，肝癌患者1年、3年生存率分别为80.5%和68.6%，而PBLD低表达组肝癌患者的1年、3年生存率仅有75.6%和26.3%，PBLD表达水平越高，其患者生存时间越长；同时，PBLD高表达组肝癌患者的1年、3年无瘤生存率也显著高于PBLD低表达组(33.3% vs 61.1%, 16.7% vs 33.3%)，PBLD的表达水平越高，其患者复发率越低。因此，PBLD mRNA的表达水平可作为判断肝癌患者预后的指标，指导临床肝癌患者的个体化治疗。

为了实现本发明的目的，本发明采用以下技术方案：

用于原发性肝细胞癌治疗方案选择和/或预后评估的检测PBLD基因表达的引物，包括上游引物5'- GGGTCTGCACACGCTGTTC-3'，和下游引物5'- TAATGTCAACCCTTCCGTCT -3'。

本发明目的之二在于提供上述引物的用途，具体地，所述用途是指所述引物在制备原发性肝细胞癌治疗方案选择和/或预后评估试剂中的应用。

本发明目的之三在于提供提供含有上述引物的原发性肝细胞癌治疗方案选择和/或预后评估的诊断试剂盒。

具体地，所述诊断试剂盒中包括上游引物5'- GGGTCTGCACACGCTGTTC-3'，和下游引物5'- TAATGTCAACCCTTCCGTCT -3'。

所述诊断试剂盒还可以包括由荧光定量PCR技术常用的试剂，如缓冲液、逆转录酶、DEPC水、dNTPs、MgCl₂、DEPC、Taq酶和荧光探针等；还可以含有标准品和/或对照品。

本发明的优点：

本发明通过特异性引物及其制备的试剂盒原发性肝细胞癌患者或活检组织做PBLD检测，依据PBLD基因表达量，可以准确评估预后，避免繁琐的统计学分析，而且还可以根据检测结果为临床医生和患者提供准确的疗效评估，用于判断患者适合何种治疗方案，指导医生选择有效的临床治疗方案，提高患者的治疗效果，实现个体化治疗。

附图说明

图1是PBLD mRNA在肝癌及癌旁组织中表达水平的对比。

图2是PBLD基因表达水平与肝癌患者生存时间的关系图。

图3是PBLD基因表达水平与肝癌患者术后复发情况的关系图。

图4是基因PCR的电泳图，图中M为标记带，1为内参GAPDH的PCR产物条带，2为的PBLD产物条带。

图5是cDNA的相对浓度与?Ct关系图；