[发明专利]一种人工熊胆粉及其制备方法

权利要求书

1.一种人工熊胆粉的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

a)将禽畜胆粉用pH＝7～9的缓冲液溶解后进行过滤，得到滤渣和滤液；

b)将所述滤液加入装有7α-羟基类固醇脱氢酶、7β-羟基类固醇脱氢酶和辅酶I或辅酶II的反应器中进行反应；所述7α-羟基类固醇脱氢酶、7β-羟基类固醇脱氢酶在反应器中以固定化的方式存在；

c)将反应完毕后的反应液冷冻干燥后与所述滤渣混合，得到人工熊胆粉；

所述步骤a)包括如下过程：所述禽畜胆粉用pH＝7～9的缓冲液溶解后，11000g条件下离心10min后，多次过滤，得到滤渣和滤液，所述滤渣冷冻干燥保存；

所述步骤c)包括如下过程：将反应完毕后的反应液冷冻干燥48h后与所述滤渣混合均匀，得到人工熊胆粉；

所述禽畜胆粉的主要成分和质量百分比如下：

总胆酸：40～65％

氨基酸：4～9％

微量元素：0.5～1％

其中，所述总胆酸中含有TCDCA，所述TCDCA占禽畜胆粉的质量百分比为40～50％。

2.如权利要求1所述的人工熊胆粉的制备方法，其特征在于，所述步骤a)中的缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液或甘氨酸-氢氧化钠缓冲液。

3.如权利要求1所述的人工熊胆粉的制备方法，其特征在于，所述步骤b)包括如下过程：所述滤液加入装有7α-羟基类固醇脱氢酶、7β-羟基类固醇脱氢酶和辅酶I或辅酶II的反应器里室温反应2～6h。

4.如权利要求1所述的人工熊胆粉的制备方法，其特征在于，所述禽畜胆粉为鸡胆粉、鸭胆粉、鹅胆粉、牛胆粉、兔胆粉、狗胆粉、羊胆粉中的一种或多种混合物。

5.如权利要求1所述的人工熊胆粉的制备方法，其特征在于，所述步骤b)包括如下酶固定化步骤：在1％的壳聚糖溶液中加入适量醋酸，制得壳聚糖醋酸溶液，将所述壳聚糖醋酸溶液注入到三聚磷酸钠溶液中固化，得到壳聚糖球；将所述壳聚糖球放入盛有0.125％戊二醛水溶液的容器中活化，得到活化壳聚糖微球；称取预定量的所述活化壳聚糖微球，装入层析柱，加入适量的7α-羟基类固醇脱氢酶和7β-羟基类固醇脱氢酶液，采用垂直混合方式使之与微球结合，得到固定化酶。

6.如权利要求1所述的人工熊胆粉的制备方法，其特征在于，在所述含有固定化酶的反应器中加入所述步骤a)中的滤液作为反应底物溶液，加入预定量辅酶I或辅酶II，使辅酶I或辅酶II:TCDCA＝1:2～1:4(摩尔比)，在20～30℃下，反应2～6h。

7.如权利要求1所述的人工熊胆粉的制备方法，其特征在于，所述7α-羟基类固醇脱氢酶和7β-羟基类固醇脱氢酶来源于撒丁岛梭菌、脆弱拟杆菌或产气柯林斯菌。

8.一种人工熊胆粉，其特征在于，由权利要求1-7任一项权利要求所述的制备方法制取；所述人工熊胆粉的主要成分和质量百分含量如下：

总胆酸：40～65％

氨基酸：4～9％

微量元素：0.5～1％；

其中，所述总胆酸含有TUDCA和TCDCA，所述TUDCA占人工熊胆粉的质量百分比为23～33％；所述TCDCA占人工熊胆粉的质量百分比为12～30％。

9.如权利要求8所述的人工熊胆粉，其特征在于，所述TUDCA和TCDCA的质量比为1～1.5。