[发明专利]一种氢氯噻嗪半抗原和完全抗原及其制备方法无效
| 申请号： | 201410573669.X | 申请日： | 2014-10-24 |
| 公开（公告）号： | CN104447619A | 公开（公告）日： | 2015-03-25 |
| 发明（设计）人： | 匡华;彭双;胥传来;徐丽广;马伟;刘丽强;宋珊珊;吴晓玲 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C07D285/28 | 分类号： | C07D285/28;C07K14/765;C07K14/795;C07K14/77;G01N33/577;G01N33/543 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利商标事务所(普通合伙) 32104 | 代理人： | 时旭丹;刘品超 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡市无锡*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 氢氯噻嗪 半抗原 完全 抗原 及其 制备 方法 | ||
1.一种氢氯噻嗪半抗原，其特征在于结构简式如下：
。
2.用权利要求1所述氢氯噻嗪半抗原制备的完全抗原，其特征在于：将氢氯噻嗪半抗原化合物与载体蛋白偶联后得到氢氯噻嗪完全抗原；
所述载体蛋白为牛血清白蛋白BSA、匙孔血蓝蛋白KLH、血蓝蛋白LPH、鸡卵清白蛋白OVA或人血清白蛋白HAS中的一种。
3.权利要求1所述氢氯噻嗪半抗原的制备方法，其特征在于步骤为：取氢氯噻嗪0.24mmol，溶解于20mL二甲基甲酰胺DMF中，加入碳酸钾0.48mmol，混匀，再加入6-溴已酸乙酯0.48mmol，60℃回流反应12h，再加入20mL超纯水和20mL乙酸乙酯，分离有机相；用旋转蒸发仪除去乙酸乙酯，得氢氯噻嗪半抗原。
4.权利要求2所述氢氯噻嗪完全抗原的制备方法，其特征在于步骤为：
（1）氢氯噻嗪半抗原的活化：将氢氯噻嗪半抗原用DMF溶解，加入NHS、EDC，其中氢氯噻嗪半抗原︰NHS︰EDC的摩尔比为1︰1.5︰1.5，在4℃下搅拌反应6h，再在室温下反应12h；
（2）载体蛋白的溶解：取载体蛋白，其中氢氯噻嗪半抗原︰载体蛋白的摩尔比为80︰1，用0.1M pH9.6碳酸盐缓冲液溶解，其中溶解后的载体蛋白浓度大于3mg/mL，且碳酸盐缓冲液与DMF的体积比例为5︰1；
（3）氢氯噻嗪完全抗原的制备：将步骤（1）所得活化的氢氯噻嗪半抗原溶液慢速滴加到步骤（2）所得载体蛋白溶液中；室温下反应24h，用PBS缓冲液透析2天，期间换水4次，即得到氢氯噻嗪完全抗原。
5.权利要求2所述氢氯噻嗪完全抗原的另一种制备方法，其特征在于步骤为：
（1）氢氯噻嗪半抗原的活化：将氢氯噻嗪半抗原用DMF溶解，0℃预冷30min，0℃下加入三正丁胺和氯甲酸异丁酯，其中氢氯噻嗪半抗原︰三正丁胺︰氯甲酸异丁酯的摩尔比为1︰2︰2，在0℃搅拌反应1h；
（2）载体蛋白的溶解：取载体蛋白，其中氢氯噻嗪半抗原︰载体蛋白的摩尔比80︰1，用0.1M pH7.4磷酸盐缓冲液溶解，0℃预冷30min，其中溶解后的载体蛋白浓度大于3mg/mL；
（3）氢氯噻嗪完全抗原的制备：在0℃条件下，将步骤（1）所得活化的氢氯噻嗪半抗原溶液在0℃条件下慢速滴加到步骤（2）所得载体蛋白溶液中，0℃条件下反应1h，然后室温下反应24h；用PBS缓冲液透析2天，期间换水4次，即得到氢氯噻嗪完全抗原。
6.权利要求2所述氢氯噻嗪完全抗原的应用，其特征在于：将氢氯噻嗪完全抗原免疫动物得到多克隆抗体和/或单克隆抗体，用于检测氢氯噻嗪。
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