[发明专利]一种噬菌体的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种噬菌体的检测方法。

背景技术

噬菌体(Bacteriophage)是在1907年和1909年分别由Twort和D.Herelle各自独立发现，噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒的总称，因部分能引起宿主菌的裂解，故称为噬菌体。噬菌体作为病毒的一种，具有病毒特有的一些特性：个体微小；不具有完整细胞结构；只含有单一核酸。噬菌体基因组含有许多个基因，但所有已知的噬菌体都是在细菌细胞中利用细菌的核糖体、蛋白质合成时所需的各种因子、各种氨基酸和能量产生系统来实现其自身的生长和增殖，一旦离开了宿主细胞，噬菌体既不能生长，也不能复制。

发酵工业常受噬菌体的危害，当出现噬菌体的时，轻则导致发酵周期长、影响产量，重则引起工厂停产，例如在发酵工业应用较广泛的是枯草芽孢杆菌，由于其具有发酵周期短、产物丰富、可利用开发价值高等优点，使它能够应用在食品加工、农业生产、能源开发等多个方面，但枯草芽孢杆菌极易感染噬菌体，枯草芽孢杆菌发酵工业受到的危害也尤其严重，因此对噬菌体的检测显得尤为重要。

目前对噬菌体检测的研究虽然已有很多，例如实验室检测发酵液噬菌体多采用双层平板琼脂法、发酵厂区空气中噬菌体的检测大多采用浮游细菌采样器检测等，但是目前的噬菌体的检测方法至少存在如下所述的缺点：

1、缺乏检测发酵生产工业厂区下水道、洗消池等液体中噬菌体的有效检测方法。

2、实验室双层平板琼脂法的操作难度较大，其准确度难以把握，需要专业人士操作才能完成，不适于发酵工业的大批量、快速检测。

3、利用浮游细菌采样器检测噬菌体费时、费力，而且需要专门的浮游细菌采样器，其价格较高，不利于降低生产成本，尤其是影响对于中小企业的发展等。

因此，目前噬菌体检测的检测方法有待进一步改进。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明公开了一种噬菌体的检测方法，该方法包括：

S100、培养基的制备：制备适于噬菌体宿主菌生长的宿主培养基；

S200、菌悬液的涂布：在所述宿主培养基上涂布噬菌体宿主菌菌悬液，形成检测培养基；

S300、噬菌体的检测：

包括：

气体中噬菌体检测：先将所述检测培养基在待测区域暴露放置，再进行培养，并利用奥梅粱斯基公式计算气体中噬菌体数量；以及

液体中噬菌体检测：先将待测液体涂布在所述检测培养基上，再进行培养，并计算液体中噬菌体数量。

其有益效果：不仅能够准确地检测发酵生产工业厂区气体中的噬菌体数量，而且能够准确地检测发酵生产工业厂区例如下水道、洗消池等处液体中的噬菌体数量；操作非常简单，不需要专业人士也可以完成检测，省时省力，适用范围更加广泛，尤其适用于快速、大批量的工业检测；检测时的要求条件极其简单，整个检测过程均不使用特殊仪器或或价格昂贵的设备，只需要冰箱、灭菌器、培养皿、温箱等常见设备，适用范围更广，有利于进一步降低企业、尤其是中小企业的生产成本。

可选的，所述噬菌体宿主菌为枯草芽孢杆菌、根瘤菌或大肠杆菌。由此，本发明可以对多种噬菌体宿主菌的发酵工业进行检测，从而使本发明的噬菌体的检测方法的适用范围更加广泛，应用价值更大。

可选的，所述宿主培养基为营养琼脂培养基、YMA培养基或LB培养基。由此，宿主培养基能够适于多种噬菌体宿主菌的生长，进而可以对多种噬菌体宿主菌的发酵工业进行检测。

可选的，所述营养琼脂培养基包含：9.0～12.0克蛋白胨、2.0～4.0克牛肉膏、4.0～6.0克氯化钠、12.0～16.0克琼脂、以及1000毫升蒸馏水；

或者，所述YMA培养基包含：2.0～3.0克酵母膏、0.1～0.3克硫酸镁、0.4～0.8克磷酸氢二钾、0.1～0.3克氯化钠、0.05～0.1克氯化钙、8.0～12.0克甘露醇、10～20克琼脂、以及800毫升蒸馏水；

或者，所述LB培养基包含：8.0～15.0克胰蛋白胨、4.0～8.0克酵母膏、10.0～15.0克氯化钠、12.0～18.0克琼脂、以及1000毫升蒸馏水。

由此，噬菌体宿主菌可以在培养基上保持良好生长，进而能够实现对噬菌体的有效检测。另外，培养基制备方法简单，制备所用原料也容易获得，从而有利于节约制备成本。

可选的，步骤S100还包括：烘干培养基。发明人发现，当培养基的水分被烘干以后，不仅噬菌体宿主细菌可以保持正常生长，而且可以减少杂菌污染的概率，进而有利于提高检测的准确性。