[发明专利]一种酶活提高的天冬酰胺酶突变体有效
| 申请号： | 201410568323.0 | 申请日： | 2014-10-22 |
| 公开（公告）号： | CN104371993B | 公开（公告）日： | 2016-10-19 |
| 发明（设计）人： | 刘松;冯岳;陈坚;堵国成;陈双全;王广圣;陈璇 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/82 | 分类号： | C12N9/82;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 天冬 酰胺酶 突变体 | ||
1.一种酶活力提高的天冬酰胺酶突变体，是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的天冬酰胺酶第133位的天冬酰胺分别突变为酪氨酸或色氨酸；或将143位的缬氨酸突变为异亮氨酸；或在将143位的缬氨酸突变为异亮氨酸的同时，将第133位的天冬酰胺分别突变为色氨酸或酪氨酸。
2.根据权利要求1所述的天冬酰胺酶突变体，其特征在于，天冬酰胺酶突变体的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.2-6所示。
3.一种获得权利要求1所述突变体的方法，是通过定点突变技术将天冬酰胺酶蛋白质分子内部第133位的天冬酰胺分别突变为酪氨酸、色氨酸；或将143位的缬氨酸突变为异亮氨酸；或在将143位的缬氨酸突变为异亮氨酸的同时，将第133位的天冬酰胺分别突变为酪氨酸或色氨酸。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，将含有编码天冬酰胺酶的基因与载体pET22b(+)连接，转化大肠杆菌E.coli rosetta；挑选转化子接种到LB液体培养基中，37℃培养12h，转接到TB培养基中，接种量为3％；菌体长到OD600为1.5时，加入IPTG诱导，并将培养温度降到30℃，培养24h，收集发酵上清，纯化获得天冬酰胺酶突变体。
5.一种表达权利要求1所述天冬酰胺酶突变体的大肠杆菌，是将含有编码天冬酰胺酶的基因与表达载体连接后转化大肠杆菌。
6.根据权利要求5所述的大肠杆菌，其特征在于，将含有编码天冬酰胺酶的基因与载体pET22b(+)连接，转化大肠杆菌E.coli rosetta。
7.权利要求1所述天冬酰胺酶突变体的应用。
8.权利要求5所述大肠杆菌的应用。
9.一种提高天冬酰胺酶活力的方法，其特征在于，是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的天冬酰胺酶蛋白质分子内部第133位的天冬酰胺分别突变为酪氨酸、色氨酸；或将143位的缬氨酸突变为异亮氨酸；或在将143位的缬氨酸突变为异亮氨酸的同时，将第133位的天冬酰胺分别突变为酪氨酸或色氨酸。
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