[发明专利]一种螺旋藻多糖及其提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然产物深加工技术领域，尤其涉及一种螺旋藻多糖及其提取方法。

背景技术

螺旋藻中包含多种生物活性物质，其中的螺旋藻多糖(含量约为2.0％～3.0％)是一种水溶性的酸性杂多糖，是从螺旋藻藻体、螺旋藻培养液中提取分离出来的一类呈白色粉末状的生物活性物质。螺旋藻多糖是螺旋藻中除藻胆蛋白外的另一种具有抗肿瘤、抗辐射、抗突变功能的生物活性物质，能够提高机体细胞和体液免疫功能，抵制癌细胞增殖，减轻辐射所引起的遗传损伤等；可用于防癌、抗衰老、增强机体免疫力等方面。但因传统热水浸提法分离纯化螺旋藻多糖中去除蛋白时需要消耗大量的有机溶剂，并且操作步骤繁琐，同时对多糖活性也有一定程度的损害，进一步的柱层析纯化多糖更是产量有限，使得螺旋藻多糖分离纯化难以工业化生产。目前，我国螺旋藻产业化生产已获得成功，其生产和发展过程中的突出问题是：螺旋藻深加工产品处于初级阶段，国内关于螺旋藻多糖提取与纯化技术多停留在实验室研究阶段，应用于生产实践较少。

目前，螺旋藻多糖的分离纯化通常采用Sevage法、TCA或者酶解法去除其中的蛋白，然后通过葡聚糖凝胶柱层析和阴离子交换柱得到纯多糖。Sevage法是去蛋白质的经典方法,但通常只适用于除少量蛋白,而且必须重复多次；TCA法去蛋白能缩短流程，多糖损失率降低，有利于后继纯化，但多糖活性损失严重；用酶法降解蛋白质能提高多糖粗产品的得率，但所得成分中仍有较多的蛋白质。

而且，这些去除蛋白方法所用的有机溶剂具有一定毒性，在去除蛋白的过程中会在一定程度上降低多糖的活性，且操作繁琐费事；而进一步纯化螺旋藻多糖所用的层析柱每次得到的多糖量有限，此外，层析柱的填充介质也存在价格昂贵、可使用次数有限等缺陷，限制了螺旋藻多糖工业化分离纯化。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种操作简单、成本低、得率高的螺旋藻多糖的提取方法。

本发明的目的是通过下述技术方案完成的：

(1)将螺旋藻粉溶解于磷酸盐缓冲液中，获得螺旋藻粉悬浊液；

(2)反复冻融所述螺旋藻粉悬浊液，使螺旋藻细胞破壁后离心，上清液为螺旋藻细胞破碎液1，沉淀为细胞碎片；

(3)在所述螺旋藻细胞破碎液1中加入硫酸铵，盐析沉淀藻胆蛋白后离心，将上清液与步骤(2)中获得的所述细胞碎片混合，获得螺旋藻细胞破碎液2；

(4)热水浸提所述螺旋藻细胞破碎液2，离心，获得螺旋藻多糖粗提物；

(5)采用乙醇/硫酸铵双水相体系萃取所述螺旋藻多糖粗提物中的螺旋藻多糖，分配平衡后取下相，获得螺旋藻多糖溶液；

(6)采用Sephadex G-150柱和DEAE Sephadex A-50柱进一步纯化所述螺旋藻多糖溶液后，透析除盐，蒸发浓缩，获得纯螺旋藻多糖溶液；

(7)冷冻干燥所述纯螺旋藻多糖溶液，获得纯螺旋藻多糖成品。

现有技术中，在螺旋藻多糖粗提过程中多数采用三氯乙酸沉淀蛋白质，但是其最适宜的用量还需要在实验中不断确定，三氯乙酸使用过量或者不足，会导致蛋白质不能完全沉淀，同时影响多糖纯度及提取率，如果三氯乙酸过量，而有机溶剂的浪费会污染到环境，另外，溶液的提取过程中提取次数的多少也关系到能否将多糖充分溶解。本发明方法对螺旋藻多糖提取工艺进行了优化，采用硫酸铵盐析结合双水相萃取技术来去除多糖中的蛋白质，具有分离操作简单、条件温和、活性损失小且不存在有机溶剂残留等优点

作为对上述技术方案的进一步改进，步骤(1)中螺旋藻粉与磷酸盐缓冲液混合时的W/V为1:50，W/V为重量/体积比，其表示的比例关系是，例如，每1g螺旋藻粉对应50mL磷酸盐缓冲液。优选地，所述磷酸盐缓冲液PBS为0.01mol/L，pH为7。