[发明专利]一种螺旋藻多糖及其提取方法

权利要求书

1.一种螺旋藻多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将螺旋藻粉溶解于磷酸盐缓冲液中，获得螺旋藻粉悬浊液；

(2)反复冻融所述螺旋藻粉悬浊液，使螺旋藻细胞破壁后离心，上清液为螺旋藻细胞破碎液1，沉淀为细胞碎片；

(3)在所述螺旋藻细胞破碎液1中加入硫酸铵，盐析沉淀藻胆蛋白后离心，将上清液与步骤(2)中获得的所述细胞碎片混合，获得螺旋藻细胞破碎液2；

(4)热水浸提所述螺旋藻细胞破碎液2，离心，获得螺旋藻多糖粗提物；

(5)采用乙醇/硫酸铵双水相体系萃取所述螺旋藻多糖粗提物中的螺旋藻多糖，分配平衡后取下相，透析除盐，蒸发浓缩，获得螺旋藻多糖溶液；

(6)采用Sephadex G-150柱和DEAE Sephadex A-50柱进一步纯化所述螺旋藻多糖溶液后，透析除盐，获得纯螺旋藻多糖溶液；

(7)冷冻干燥所述纯螺旋藻多糖溶液，获得纯螺旋藻多糖成品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中螺旋藻粉与磷酸盐缓冲液混合时的W/V为1:50。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)反复冻融的具体步骤如下：将所述螺旋藻粉悬浊液于4℃静置4h后，放于-20℃冰冻3h，然后采用机械方法将冰冻后的冰块破碎，如此反复三次；步骤(2)中离心转速为6000rpm/min，离心时间为20min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中加入硫酸铵的量为至其饱和度的50％；盐析温度为4℃，盐析时间为12h；步骤(3)中离心转速为9000rpm/min，离心时间为30min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)热水浸提的具体操作如下：将所述螺旋藻细胞破碎液2置于80℃恒温水浴锅中提取4h，并不断搅拌，提取完成后冷却至室温；步骤(4)中离心转速为6000rpm/min，离心时间为20min。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(5)中所述乙醇/硫酸铵双水相体系的组分为36.45％(w/w)乙醇和13.4％(w/w)硫酸铵，体系相比V_R为2.5；所述萃取的具体步骤如下：25℃下分配平衡30min后，于分液漏斗中静置4h。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(6)中采用SephadexG-150柱纯化时，洗脱液为0.1mol/L的NaCl溶液；采用DEAE Sephadex A-50柱纯化时前10管洗脱液为去离子水，后30管洗脱液为0～2mol/L的NaCl溶液。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(6)和步骤(7)中的所述透析在3500Da的透析袋中进行，具体透析步骤如下：先在流动自来水中透析24h，再在去离子水中透析12h，换4次透析液。

9.一种采用权利要求1～5任一项所述方法制备的螺旋藻多糖溶液。

10.一种采用权利要求1～8任一项所述方法制备的纯螺旋藻多糖成品。