[发明专利]嵌合HCV中和表位的HBV S抗原病毒样颗粒及其制备方法和应用

权利要求书

1.嵌合HCV中和表位的HBV S抗原病毒样颗粒，其特征在于，该病毒样颗粒是将HCV表位插入HBV S抗原亲水区构建真核表达载体，再经哺乳动物细胞体外装配制得；

其中，所述的HCV表位为氨基酸序列如SEQ.ID.NO：1～4中任意一项所示的表位。

2.根据权利要求1所述的嵌合HCV中和表位的HBV S抗原病毒样颗粒，其特征在于，氨基酸序列如SEQ.ID.NO：1～3所示的表位为高度保守的中和表位；氨基酸序列如SEQ.ID.NO.4所示的表位为高变区的模拟表位。

3.根据权利要求2所述的嵌合HCV中和表位的HBV S抗原病毒样颗粒，其特征在于，氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示的表位为HCV E1区线性中和表位；氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1和SEQ.ID.NO.2所示的表位为HCV E2区线性中和表位；所述高变区的模拟表位为HCV E2模拟表位。

4.嵌合HCV中和表位的HBV S抗原病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)在HBV S基因亲水区引入Age I克隆位点

将引入Age I克隆位点的全长S基因亚克隆至真核表达载体pCI-neo中，得到重组真核表达载体pCI-HBS；

2)将HCV表位以引物合成的形式克隆入重组真核表达载体pCI-HBS中

以pCI-HBS为模板，分别用FE1Age I/R2Xba I，FE2Age I/R2Xba I，FE3Age I/R2Xba I，FE4Age I/R2Xba I为引物，扩增得到引入不同表位的HBV S下游128-227位氨基酸的碱基序列，扩增产物回收后连接入T-easy载体，分别得到T-HBSE1，T-HBSE2，T-HBSE3和T-HBSE4；

3)构建嵌合HCV中和抗原表位真核载体

将T-HBSE1，T-HBSE2，T-HBSE3和T-HBSE4分别用Age I/Xba I双酶切，克隆入Age I/Xba I双酶切的pCI-HBS中，得到重组的嵌合HCV中和抗原表位的真核表达载体，分别为pCI-HBSE1，pCI-HBSE2，pCI-HBSE3和pCI-HBSE4；

4)病毒样颗粒的制备

分别将pCI-HBSE1、pCI-HBSE2、pCI-HBSE3和pCI-HBSE4转染哺乳动物细胞，转染48h后收集培养上清，定量测定HBsAg含量，得到四种不同的嵌合病毒样颗粒VLPs，分别命名为VLPs-SE1、VLPs-SE2、VLPs-SE3和VLPs-SE4。

5.根据权利要求4所述的嵌合HCV中和表位的HBV S抗原病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，步骤2)所述的以引物合成的形式克隆HCV表位所用到的引物F1、R1、F2、R2、FE1、FE2、FE3和FE4的核苷酸序列分别如SEQ.ID.NO：5～12所示。

6.根据权利要求4所述的嵌合HCV中和表位的HBV S抗原病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，步骤4)所述的哺乳动物细胞为HEK293T、Hela或Huh7.5细胞。

7.根据权利要求4所述的嵌合HCV中和表位的HBV S抗原病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，步骤4)采用磷酸钙法或脂质体法转染哺乳动物细胞。

8.根据权利要求4所述的嵌合HCV中和表位的HBV S抗原病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，步骤4)是采用罗氏E601电化学发光分析仪对HBsAg含量进行定量测定。

9.权利要求1所述的嵌合HCV中和表位的HBV S抗原病毒样颗粒在制备用于治疗HCV感染病症的疫苗中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的疫苗为抑制HCVpp和HCVcc感染Huh7.5细胞的疫苗。