[发明专利]一种抗胸苷激酶1抗体的制备方法及其在解脲支原体菌增殖中的应用

说明书

本发明提供了解脲支原体胸苷激酶1(Ureaplasma urealyticum thymidine kinase1，UuTK1)抗原设计及其抗体制备方法。本发明提供的UuTK1的抗体及其组合试剂盒，能特异性的识别UuTK1抗原，用于检测解脲支原体的增殖度。本发明提供的抗体试剂盒具有灵敏度高，特异性高，成本低廉等特点，用于检测人泌尿生殖道和和新生儿呼吸道感染疾病人群中解脲支原体增殖速度的应用。

【技术领域】

本发明涉及一种抗体的制备方法及其应用，具体讲涉及一种解脲支原体胸苷激酶1(Ureaplasma urealyticum thymidine kinase1，UuTK1)抗体的制备方法及其在用于检测人泌尿生殖道和呼吸道感染解脲支原体增殖度。

【背景技术】

解脲支原体(Ureaplasma urealyticum，简称Uu)是从非淋球菌尿道炎(NGU)患者的尿道分泌物中分离的一种没有细胞壁的原核细胞，根据其分解尿素的特性命名为解脲支原体(Uu)，其包括2个生物群，14个血清型。生物1群称为细小脲原体(Ureaplasma parvum，简称Up，含1、3、6、14共4个血清型，而将生物2群继续称为解脲支原体(Ureaplasmaurealyticum，简称Uu，含血清型2，4，5，7和7至13。目前关于生物1群的1和3血清型，生物2群的4和8血清型与感染和致病性相关性的报导存在争议。

人体泌尿生殖道存在的解脲支原体(UreaplasmaUrealyticum，Uu)大部分为正常菌群，是常见的共生微生物，在健康人(包括婴幼儿)中是同样存在Uu的寄居。发现Uu在孕妇生殖道的寄居率高达50-80％。所以检查出Uu寄居情况，这并不代表感染这种疾病，只有部分解脲支原体亚型感染时才致病。当人的抵抗力下降时，例如体质虚弱，纵欲过度造成性器官长期慢性充血或局部抵抗力下降，解脲支原体侵入机体组织与血液，或粘附于泌尿生殖道上皮细胞后，该部位组织的解脲支原体大量繁殖而出现的炎症和一系列并发症症状，称为“感染”。当泌尿生殖道发生炎症，粘膜表面受损时解脲支原体易从破损口侵入，引起泌尿生殖道感染，但其具有潜伏期，而无临床症状，因此临床检查到Uu阳性，并不能判断是携带还是感染状态。Uu感染后，患者大多无明显症状，很难被患者觉察，也易造成医生漏诊。

目前常规的解脲支原体的检测方法包括：形态学检查、支原体培养、抗原检测、血清学方法和分子生物学方法，例如PCR技术，TDI-FP技术荧光偏振与模板指导的末端延伸反应检测技术，微孔渗漏法，免疫组织化学，其中准确性和重复性好的为传统的病原学检测方法，即取尿道分泌物、阴道分泌物作为支原体培养的，这也是确定Uu感染的金标准。该方法利用Uu分解尿素时产生碱性的NH₃能使酚红指示剂发生由黄变红的特性，但直接将检测标本接种于液体培养基，若液体培养基被标本中的产酸菌污染，Uu产生的碱性物质即被中和，也随之产生假阴性。因此液体培养不能准确判断支原体感染的有无，而且一种液体培养基也不能同时判断两种支原体感染。与液体培养基相比，现提出固体培养基改良方法污染率明显低于液体培养法，但分离阳性率无统计学差异。而分子生物学方法，例如：常规PCR、PCR-SSCP、荧光PCR、TDI-FP(荧光偏振与模板指导的末端延伸反应检测技术)、PCR-系统进化分析法等进行多种支原体的检测，具有快速、特异性强等优势，但荧光PCR法质控要求高，需要相应的实验条件和设备，比较适合大型医院，作为常规检测方法有一定的限制。与培养法检测结果比，现应用的荧光PCR法，无统计学意义。

现有的测定解脲支原体抗体的血清学试验方法，有特异性血清学检测和非特异性血清学检测。特异性血清学检测方法中，最常用的是补体结合试验，另有间接免疫荧光染色检查法、生长抑制试验、代谢抑制试验、间接血凝试验、酶免疫法和酶联免疫吸附试验(ELISA)等。非特异血清学方法有肺炎支原体冷凝集试验与MG链球菌凝集试验，对支原体肺炎能起辅助诊断的作用。免疫组化法检测Uu抗原等技术也在应用。其缺点是检测特异性抗体IgG的方法尚不能达到早期快速诊断，灵敏度比较低；MB抗原与疾病的关系，以及它在疾病中的作用还有待进一步探讨。