[发明专利]糖化血红蛋白的测定方法

说明书

本申请是申请号为201180038604.X(国际申请号为PCT/JP2011/068104)、中国国家阶段进入日为2013年2月5日(国际申请日为2011年8月9日)、发明名称为“糖化血红蛋白的测定方法”的中国发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及含有血红蛋白的试样中的糖化血红蛋白的测定方法、测定试剂及测定试剂盒。另外，本发明涉及含有无色型色原体的水溶液的保存方法、无色型色原体的稳定化方法。

背景技术

糖化血红蛋白是在血红蛋白上结合葡萄糖而成的糖化物。血红蛋白具有由α链、β链构成的四聚体结构，但将β链的N末端糖化后的血红蛋白称为血红蛋白A1c，血糖值越高越增加，因此，作为糖尿病标志物，在临床检查中进行日常测定作为血糖控制的指标。

作为糖化血红蛋白的测定方法，已知HPLC法等色谱法、电泳法、胶乳免疫凝聚法等利用抗体的免疫测定法、使用作用于糖化蛋白的酶和作用于糖化肽和/或糖化氨基酸的酶的酶测定法等。

作为糖化血红蛋白的酶测定法，已知如下方法等：首先，通过改性剂使含有血红蛋白的试样中的糖化血红蛋白改性，使蛋白质分解酶作用于改性糖化血红蛋白，接着，使糖化肽氧化酶作用于生成的糖化肽，使生成的过氧化氢在过氧化物酶等过氧化活性物质存在下与氧化显色型色原体反应而导入色素中，由生成的色素的吸光度测定糖化血红蛋白。在此，改性剂用于使蛋白质分解酶能够作用于糖化血红蛋白，目前为止已知：含有乙酸基的化合物或其盐、N-酰基牛磺酸或其盐、聚氧乙烯烷基醚硫酸或其盐(专利文献1)；聚氧乙烯烷基醚硫酸盐类、聚氧乙烯烷基苯基醚硫酸盐类等阴离子类表面活性剂(专利文献2)；月桂基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠等磺酸化合物(专利文献3)；磺酸化合物和硝基化合物(专利文献4)；季铵盐、烷基苄基二甲基氯化铵、月桂基二甲胺氧化物等(专利文献5)改性剂。

另外，糖化血红蛋白的酶测定法中，经常使用如下方法：将糖化血红蛋白转变成过氧化氢，使所生成的过氧化氢在过氧化物酶等过氧化活性物质存在下与氧化显色型色原体反应而导入色素中，由所生成的色素的吸光度测定糖化血红蛋白。在此，作为氧化显色型色原体，经常使用无色型色原体。无色型色原体是在过氧化物酶等过氧化活性物质存在下与过氧化氢反应而生成色素的色原体的一种，与耦合型色原体不同，无色型色原体是其本身单独即可生成色素的色原体，已知有吩噻嗪类的无色型色原体、三苯基甲烷类的无色型色原体、二苯胺类的无色型色原体等(例如参照专利文献6～8)。

作为高灵敏度色原体，无色型色原体适合用于对试样中仅微量存在的应该定量的成分进行定量(例如参照非专利文献1)。但是，另一方面，其保存稳定性差，特别是具有在溶液中随时间而自然显色的缺点，由于该无色型色原体所具有的稳定性不良，产生无法准确地测定试样中应该定量的成分的问题。

针对该无色型色原体所具有的稳定性不良的问题，目前为止已研究并报道了无色型色原体在溶液中稳定化的方法(例如参照专利文献9、10)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：WO2006/013921小册子

专利文献2：WO2005/049858小册子

专利文献3：WO2004/007760小册子

专利文献4：WO2003/107011小册子

专利文献5：日本特开2009-159989号公报

专利文献6：日本特开昭57-029297号公报

专利文献7：日本特开平3-206896号公报

专利文献8：日本特开昭62-093261号公报

专利文献9：WO2005/088305小册子

专利文献10：WO2007/083703小册子

非专利文献

非专利文献1：临床检查,1997年,Vol.41,No.9,p.1014-1019

发明内容

发明所要解决的问题

在糖化血红蛋白的酶测定法中，关于目前已知的糖化血红蛋白的改性剂，由于糖化血红蛋白的改性不充分，因此，无法令人满意地进行蛋白质分解酶反应，存在不能进行糖化血红蛋白的准确测定的问题。另外，在糖化血红蛋白的测定方法中，关于所使用的无色型色原体，以往已知的保存方法需要在严苛的条件下进行保存等，不一定可以说是能够令人满意的方法。