[发明专利]幽门螺杆菌血清型分型方法及其生物芯片的构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种细菌的血清学分型方法，特别涉及一种幽门螺杆菌血清型分型方法，本发明还涉及幽门螺杆菌生物芯片的构建方法。本发明属于生物技术领域。

背景技术

1983年，Warren和Marshall成功地从慢性胃炎患者胃粘膜活检组织中分离出幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)。经进一步研究发现，Hp感染与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌、胃MALT淋巴瘤等疾病的发生密切相关，1994年世界卫生组织/国际癌症研究机构(WHO/IARC)又将幽门螺杆菌定为Ⅰ类致癌原。随着对Hp广泛深入研究，有的学者认为Hp感染还与过敏性紫癜、冠心病、糖尿病并发症、帕金森氏症和老年痴呆症等疾病的发病有关。因此，对幽门螺杆菌的诊断和积极治疗可有效降低上述疾病的发病率。

目前对于幽门螺杆菌的诊断多采用呼气试验，胃镜咬检组织进行幽门螺杆菌培养等方法。呼气试验只是简单定性；通过胃镜咬检组织做幽门螺杆菌培养虽是鉴定的金标准，但其培养条件高，培养技术难，同时对病人有一定的创伤，因此不易推行。如果利用血清诊断检测幽门螺杆菌，既可以弥补上述检测方法的不足，同时操作简单，准确性高，重复性强。

幽门螺杆菌的基因分型主要是基于两个毒素基因：细胞空泡毒素(vacA)和细胞毒素相关蛋白(cagA)。根据cagA把临床菌株分为cagA阳性和cagA阴性两种菌株。幽门螺杆菌vacA基因由s区和m区两部分组成，vacA基因的5’有s1和s2两种类型，其中s2型中含有12个氨基酸氨基末端疏水性片段，而sl型没有该片段，据此sl又可分为sla型和slb型。根据其中间区基因差异又可分为ml、mla、mlb、mlc、mlb-m2、m2a、m2b等类型。因而，这些等位基因理论上应该有多种基因组合(不同的s与m组合)，不同菌株可能有不同基因组合。随着对Hp菌株vacA基因分型工作的不断深入，vacA基因的遗传多态性及不同地区优势基因型的分布逐渐开始明朗，例如研究发现东欧和北欧是以sla型为主，北美以sla和slb型为主，二者比例接近；而在南美主要以slb/ml型为主；日本和韩国以sla-ml型为主，占90％以上；而在国内不同地区vacA基因型的分布也存在差异，例如西安地区以sla/ml居多，南京地区主要分布sla/ml和sla/m2型，湖北地区则以sla-m2型为主。由于不同基因组合的幽门螺杆菌毒力不同，致病能力不同，感染后的临床结果也不同，因此需要建立幽门螺杆菌区域毒力流行株。

目前幽门螺杆菌血清分型基于脂多糖的重复寡糖结构，分为O1-O6，见图1。和其他革兰阴性菌相比，幽门螺杆菌脂多糖结构比较独特，与哺乳动物组织和血型抗原的O型链的PS区域具有同源性。1998年,Ilver等用亲和标记技术找到了幽门螺杆菌体表面能够与Le^b发生特异性结合的蛋白,将其命名为血型抗原结合粘附素(blood group antigen binding adhesion,BabA)。BabA是迄今为止发现的唯一确定特异性结合于血型抗原-Le^b抗原的粘附素。Lewis血型抗原是一组可溶性抗原,它是在组织细胞(如消化道上皮细胞)上合成并分泌到血浆、分泌液等处，进一步通过血液循环粘附到红细胞表面而形成红细胞Lewis血型。Lewis血型抗原分为I型和II型,I型包括Le^a、Le^b，II型抗原包括Le^x、Le^y,是I型抗原的同分异构体。Lewis及ABO血型的基因产物来自同一种前身物质H抗原。ABO血型物质的基础是Hh血型系统,H抗原是A抗原和B抗原的前身物质,然后由ABO基因决定产生相应的A抗原和B抗原,红细胞表面H抗原的控制基因是FUT1,但H抗原不是FUT1基因的直接产物,H抗原唯一依赖的是FUT1的直接产物-α(l,2)岩藻糖基转移酶(αl,2fucosyltransferase,αl,2FT),该酶负责将岩藻糖连接到糖链前身而形成H抗原。在此基础上,A、B基因的产物分别使N-乙酰半乳糖和D-半乳糖连接到H抗原的第一个半乳糖上,于是H抗原转变为A、B抗原；O型血的血型抗原即为H抗原。ABO血型抗原是在不同糖基转移酶作用下合成的寡聚糖分子,经典的观点认为这些寡聚糖分子是红细胞的多态抗原,仅表现在红细胞表面,而随后的深入研究表明:有些人的唾液或其它形式的分泌液中也可以检测出可溶性的HAB血型物质,称为分泌型(secretor),有些人则为非分泌型(nonsecretor)。