[发明专利]声诺维联合声动力学疗法协同杀伤CT26细胞的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种声敏剂华卟啉钠介导的声动力学疗法结合超声微泡造影剂声诺维杀伤小鼠结直肠癌CT26细胞的方法。

技术背景

恶性肿瘤是威胁人类健康的主要疾病之一，目前治疗恶性肿瘤的方法有很多，但主要方法依然为传统的放疗、化疗及手术治疗。传统方法治疗恶性肿瘤的效果毋庸置疑，但在其保证治疗效果的同时，也存在很大的缺陷。化疗及放疗严重的毒副作用及外科手术对患者形体上的创伤都显示出了传统疗法的缺陷，因此寻找一种安全靶向的新型肿瘤治疗手段一直是当代医学研究的热点。目前光动力学疗法、放化疗与其他疗法及药物的联合作用及中药疗法已经作为肿瘤治疗的新手段开始了大量研究。光动力学疗法因其靶向性高、毒副作用小等优点在Dougherty课题组首次报道之后，受到众多学者的关注，并已批准应用于临床治疗，目前已在皮肤等浅表肿瘤的治疗中取得了良好的治疗效果。但光动力学疗法由于激光的穿透力较弱，无法对深层肿瘤达到一定的治疗效果。

为解决光动力学疗法的缺陷，研究者利用超声代替激光来激活肿瘤组织中的光敏剂达到靶向杀伤肿瘤细胞的效果，并将这种新型肿瘤治疗手段命名为声动力学疗法。超声作为一种机械波对生物组织有较强的穿透力，并且聚焦超声能无创伤的聚焦于深层组织。目前大部分光敏剂被发现同时可以被超声激活，产生活性氧等化学物质，诱导肿瘤细胞凋亡、坏死，有效抑制肿瘤组织的生长。声动力学疗法作为一种新型的肿瘤治疗手段，具有安全、靶向、微创、应用范围广等诸多优点，声动力学疗法自问世以来，研究者对其进行了大量的研究并取得了一定的成就，也显示出了声动力学疗法较好的应用前景。

随着声动力学疗法研究的深入开展，已有学者开始使用纳米级声敏剂或将声动力学疗法与其他疗法相结合从而拓宽声动力学疗法的使用范围及增加声动力学疗法的抗癌效果。2013年阮等初步探索了声敏剂联合声诺维对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的杀伤效果，实验采用20μg/mL血卟啉结合1.5W/cm²超声辐照处理MDA-MB-231细胞，超声联合血卟啉及声诺维处理组细胞存活率明显降低至31.47％，说明声动力学疗法联合超声微泡造影剂作为一种新的杀伤肿瘤细胞的尝试能够显著降低超声及声敏剂的有效协同作用阈值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种声敏剂华卟啉钠介导声动力学疗法与超声微泡声诺维联合使用杀伤小鼠结直肠癌CT26细胞的方法。

解决上述技术问题所采用的技术方案是：将小鼠结直肠癌CT26细胞在含10％胎牛血清、1％青霉素、1％链霉素、1％谷氨酰胺的RPIM1640培养基中培养，待细胞贴壁生长状态良好后，在含0.5～4μg/mL华卟啉钠、1％青霉素、1％链霉素、1％谷氨酰胺的RPIM1640培养基中继续培养3～5小时，加入声诺维，声诺维数量与小鼠结直肠癌CT26细胞数量比值为5～10:1，在频率为1.0MHz、输出声强为0.36～0.54W/cm²条件下超声处理30～60s。

本发明优选将细胞贴壁生长状态良好的小鼠结直肠癌CT26细胞在含1～2μg/mL华卟啉钠、1％青霉素、1％链霉素、1％谷氨酰胺的RPIM1640培养基中继续培养4小时，加入声诺维，声诺维数量与小鼠结直肠癌CT26细胞数量比值优选5:1，在频率为1.0MHz、输出声强为0.36～0.54W/cm²条件下超声处理30～60s。

上述的小鼠结直肠癌CT26细胞在RPIM1640培养基中的接种密度优选为2×10⁵～4×10⁵个/mL。

上述的声敏剂华卟啉钠是从光敏剂Photofrin II中分离纯化出来的，是一种以醚键连接的卟啉二聚体钠盐，结构式如下：

本发明采用声敏剂华卟啉钠结合超声微泡造影剂声诺维，在超声刺激下杀伤小鼠结直肠癌CT26细胞，实验结果证明，超声与华卟啉钠结合声诺维后表现出很好的协同作用，对CT26细胞具有很高的杀伤效果。

附图说明

图1是华卟啉钠对细胞存活率的影响。

图2是超声对细胞存活率的影响。

图3是不同处理方法作用4小时后对细胞存活率的影响。

图4是不同处理方法作用24小时后对细胞存活率的影响。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明进一步详细说明，但本发明的保护范围不仅限于这些实施例。

实施例1