[发明专利]复合生物活性因子的冻干方法及冻干粉

说明书

技术领域

本发明涉及生物组织培养技术领域，尤其涉及一种复合生物活性 因子的冻干方法及冻干粉。

背景技术

生物活性因子由多种细胞类型通过旁分泌、自分泌或内分泌的方 式产生，能够调节细胞的生长、分化和免疫等功能，尤其能够有效的 与皮肤细胞发生作用，参与炎症发生和创伤愈合。例如：生物活性因 子能够促进上皮细胞的营养代谢，预防皮肤受到紫外线、自由基等侵 害；生物活性因子还能促使真皮层胶原细胞的增生，加速术后皮肤的 修复。

常见的细胞分泌的生物活性因子有EGF(中文：表皮生长因子，英 文：epidermalgrowthfactor)，BFGF(中文：碱性成纤维细胞生长因 子，英文：basicfibroblastgrowthfactor)，VEGF(中文：血管内皮生 长因子，英文：vascularendothelialgrowthfactor)等。包含多种生活因 子的组合体可以称为复合生物活性因子。复合生物活性因子除了具备各 种生物活性因子自身的功能外，各种生物因子之间还可以相互促进，所 以，复合生物活性因子在医疗和化妆品等行业具有重要作用。

复合生物活性因子的保存方法直接影响其生物活性的高低以及保 存时间的长短，进而影响复合生物活性因子的应用。对于生物制品， 常见的保存方法有冷冻干燥保存方法，冷冻干燥又称升华干燥，是将 需要干燥的物料溶液预先冻结成固体，然后在低温低压条件下，从冻 结状态不经过液态而直接升华去除水分的一种干燥方法。此过程中物 料的干燥是在冻结状态下完成的，所以物料的组织结构和外观形态将 会被较好地保存。

现有技术也不乏利用冷冻干燥方法获取的生物制品，例如，公开 号为CN101444619A的专利，提供了一种不含人血白蛋白的细胞因子 冻干制剂配方，并具体公开了该配方的组成为：

再例如，公开号为CN103251649A的专利提供一种人间充质干细 胞培养上清液冻干粉及其制备方法，并具体公开了该冻干粉的制备过 程为：在超净工作台中用50mL无菌离心管收集低传代数的人间充质干 细胞培养液上清液，在4℃，400g离心15min；在超净工作台中打开离 心管，用无菌枪头吸出离心管中的上清液至一无菌的收集管中，弃沉 淀，记录标志，-80℃冻存凝固备用；将-80℃冻存凝固的上清液抽真空， 升华干燥，除去冰晶。最后制得冻干粉，-20℃保存。将筛选合适的阳 性菌株进行扩大化培养，离心收集菌体，用细胞裂解液裂解后经超声 破碎，离心收集上清，阳离子交换层析粗提融合蛋白。层析峰上Ni金 属亲和层析提纯融合蛋白，收集蛋白峰过SephadexG50柱除盐，获得 目标蛋白。

但是现有技术公开的冷冻干燥方法都存在一些缺陷，不利于复合 生物活性因子的冻干保存，例如，在公开号为CN101444619A的专利 中，采用了吐温系列，该系列物质有溶血作用，会限制复合生物活性 因子冻干粉后期的使用；并且冻干过程中加有磷酸盐缓冲液，其中含 有大量的盐分，会降低复合生物活性因子的活性。公开号为CN 103251649A的专利中，在升华干燥前液体需要-80℃冻存凝固，非常耗 费能量，导致成本增加；并且获得的冻干粉需要-20℃保存，保存条件 非常苛刻，不利于保存和运输。

发明内容

本发明的主要目的在于，提供一种复合生物活性因子的冻干方法 及冻干粉，提高复合生物活性因子冻干粉的生物活性和稳定性，且能 够在冷藏或者常温下保存较长时间。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一方面，本发明实施例提供一种复合生物活性因子的冻干方法， 包括：

将保护剂与5-10份包含复合生物活性因子的溶液混合所得的混合 液依次经过预冻、加强预冻、升华干燥和解析干燥处理；

其中，所述保护剂包括5-10份多元醇，所述混合液除所述保护剂 和复合生物活性因子溶液之外的其余部分为纯净水。

优选的，所述复合生物活性因子溶液至少包括：人表皮生长因子 hEGF、血管内皮生长因子VEGF、成纤维细胞生长因子FGF、转化生 长因子-β1TGF-β1、转化生长因子-β2TGF-β2、类胰岛素一号增长因子 IGF-1、类胰岛素二号增长因子IGF-2、角质细胞生长因子KGF、血小 板衍生生长因子PDGF。

优选的，所述预冻的目标温度为-30—-50℃，时长为1-2小时；