[发明专利]抗人TNF-αIgY抗体及其治疗皮肤疾病的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域。本发明涉及抗人肿瘤坏死因子α(TNF-α)卵黄抗体IgY及 其制备方法，含其药物组合物，以及其治疗皮肤疾病的应用。

发明背景

酒糟鼻(Rosacea)、湿疹(Eczema)、银屑病(Psoriasis)是常见的、多发的皮肤疾 病。本发明者继ZL97112184.2和ZL99119812.3后，进一步证明，酒糟鼻、湿疹、银屑病等 皮肤炎症性疾病均与局部皮肤组织内的“细胞因子风暴”(CytokineStorm)相关。应用抗 细胞因子(IL-1、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IL-23、TNF-α、MCP-1等)及其受体的抗体 制成外用药，能进入炎症皮肤组织，中和、排除皮肤组织内过量表达和分泌的炎症因子，阻 断和抑制“细胞因子风暴”，有效地治疗各种皮肤炎症性疾病。

酒糟鼻、湿疹、银屑病患者中，肿瘤坏死因子-α过度表达，其中患者皮损区的TNF-α比 皮损区周围正常皮肤表皮及正常人皮肤表皮的TNF-α显著增高。患者外周血单核细胞(PBMC) 中TNF-αmRNA的表达与正常人对照，使用半定量逆转录-多聚酶联反应来检测，发现酒糟鼻、 湿疹和银屑病患者PBMC中TNF-αmRNA表达显著增高，为了排除TNF-α基因表达的影响，用 高度敏感的酶联免疫吸附法只测定TNF-α三聚体分子活性，发现患者血浆中TNF-α水平显 著增高。

TNF-α的生物学活性主要是通过细胞膜上的特异性受体传递信号而实现的。TNF-α受体 有两种，即相对分子量分别为55000的TNF-RI(CD120α)和75000的TNF-RII(CD120β)，该两 种TNF受体均为糖蛋白，氨基酸顺序分析显示两类受体胞外区域的氨基酸序列高度相似，但是 胞内区域则完全不同。由于他们的不同信号传递机制，二者除分子量不同外，在配体结合力、 糖基化程度、免疫反应性和蛋白水解肽链图谱学方面均有差异。TNF-RI引起的作用非常广泛， 它包括杀伤细胞活性、抗病毒活性、诱导Mn-SOD、ICAM-1及IL-6的表达、促进成纤维细胞增 殖以及细胞程序化死亡、激活NF-KB等多种生物学、活性物质的信号传递。TNF-RII主要传递 胸腺细胞和NK等淋巴细胞的增殖信号，通过促进TNF-α结合TNF-RI而增加TNF-RI诱导的作用， 同时也增加ICAM-1的表达。

TNF-α是与皮肤免疫炎症反应密切相关的重要细胞因子之一，TNF-α不仅能够诱导皮肤 内粘附分子的表达，促进淋巴细胞的浸润，加速朗格罕氏细胞的成熟，增强其活化T细胞的 能力，而且还能够促进角质形成细胞的增殖。TNF-α的两个受体皆以可溶性形式存在细胞表 面。TNF-α必须与细胞表面的受体结合才能激活细胞信号转导，发挥促炎症及免疫调节等方 面的作用。

传统上治疗皮肤炎症疾病广泛选用抗生素类或激素类药物，这些药物长期使用会让患者 产生依赖性；而且激素会破坏患者的免疫系统和抵抗力，对患者的身体健康有很大的副作用 并且不能从根本达到治愈疾病的目的。综上所述，TNF-α是导致皮肤免疫炎症反应关键的细 胞因子之一，我们利用生物技术制备了抗人TNF-α卵黄抗体IgY，较治疗银屑病的单抗制剂 更好，因为多克隆的卵黄抗体能识别更多TNF-α靶分子位点，亲和力更好。本发明旨在通过 特异性的抗人TNF-α卵黄抗体IgY与TNF-α特异性结合，阻断其与TNF受体结合而达到中 和TNF-α的生物活性，从根本上阻止其下游促炎症等作用，最终达到治疗皮肤炎症的目的。

发明内容

本发明的目的在于提供能用于治疗酒糟鼻、湿疹和银屑病等常见皮肤病的抗体。

酒糟鼻、湿疹和银屑病等皮肤疾病发病机理是皮肤组织内发生的″细胞因子风暴″ (CytokineStorm)引起的。抗细胞因子(炎症因子)抗体能有效中和、排除皮肤组织内 过量表达和分泌的炎症因子，阻止和消除″细胞因子风暴″，从而有效地治疗多种皮肤疾病。 卵黄抗体为多克隆抗体，能识别″靶″分子上多个结合位点，较单克隆抗体(识别单个结合位 点)具有更高的生物活性和治疗效果。而且，卵黄对人体皮肤外用，无毒副作用。

一方面，本发明提供了一种能有效治疗皮肤疾病的抗TNF-α卵黄抗体IgY。