[发明专利]抗人TNF-αIgY抗体及其治疗皮肤疾病的应用

权利要求书

1.一种用于治疗皮肤疾病的抗人TNF-α卵黄抗体IgY。

2.权利要求1所述的抗人TNF-α卵黄抗体IgY，其通过下述方法制备、分离和纯化而成：(a)用人TNF-α蛋白免疫产蛋鸡，收集鸡蛋；(b)分离卵黄纯化获得所述抗人TNF-α卵黄抗体IgY。

3.权利要求1或2所述的抗TNF-α卵黄抗体IgY，其通过下述方法制备、分离和纯化而成：(a)100ug抗原加等体积氟氏完全佐剂乳化到滴水不化即可，于鸡背部皮下多点注射，注射总体积400ul/只。一周后，第二次免疫：50ug抗原加等体积氟氏不完全佐剂乳化到滴水不化即可，于鸡背部皮下多点注射，注射总体积400ul/只。第二次免疫一周后进行第三次免疫，免疫剂量和方法同第二次。第三次免疫后一周采鸡翅静脉血，分离血清。间接法ELISA测抗血清效价。收集效价达十万以上鸡蛋。(b)打破鸡蛋壳，用蛋黄分离器小心分离卵黄，保证卵黄膜未破裂。将卵黄在普通滤纸翻滚数次，将卵白吸除干净，卵黄破膜收集卵黄。用2倍卵黄体积的10mMpH7.4PBS稀释卵黄，室温搅拌；用3.5％PEG6000沉淀稀释后的卵黄，10000rpm4℃离心10分钟。离心后收集上清，经普通滤纸过滤去除不溶物；向过滤后上清中加入8.5％PEG6000，室温搅拌20分钟，离心弃去上清，沉淀用卵黄体积的10mMpH7.4PBS溶解。待沉淀溶解后，向其中加入12％PEG6000沉淀卵黄抗体，室温搅拌20min；离心弃上清，沉淀用一半卵黄体积的10mMpH7.4PBS重悬溶解。在4℃条件下加入33％饱和硫酸铵，搅拌1小时，离心弃上清，沉淀用10mMpH7.4PBS1ml重悬溶解。溶解后的沉淀对PBS透析，20小时以上，每6至8小时更换透析液一次，收集透析过的抗人TNF-α卵黄抗体IgY，所述人TNF-α卵黄抗体IgY的纯度为98％。

4.权利要求1至3任一项所述的抗人TNF-α卵黄抗体IgY在制备用于治疗皮肤疾病的外用药物中的用途。

5.权利要求4所述的用途，其中所述的皮肤疾病为酒糟鼻、湿疹或银屑病等常见皮肤病。

6.一种用于治疗皮肤疾病的外用药物，其中权利要求1至3任一项所述抗TNF-α卵黄抗体IgY和药用辅料或药用基质。

7.权利要求6所述治疗皮肤疾病的外用药物，其中所述药物辅料为甘油。

8.权利要求7所述治疗皮肤疾病的外用药物，其中所述抗TNF-α卵黄抗体IgY的浓度为0.5mg/ml。

9.权利要求6所述治疗皮肤疾病的外用药物，其中所述药用基质的配方为：

10.一种用于治疗牛皮癣的方法，该方法包括将所述外用制剂施用于患处，每日涂抹两次，每次约200微升，3周为1个疗程。