[发明专利]RNA纳米颗粒及其在胃癌防治中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物纳米颗粒，尤其涉及一种RNA纳米颗粒，以其作为载体进行siRNA体内和体外递送的方法，以及以近红外染料标记后的RNA纳米颗粒在皮下瘤模型中的活体荧光成像中的应用

背景技术

胃癌具有发病率高、易转移和病死率高等特点,根据临床统计,根治术后肿瘤的复发和转移率高达33％。在中国，胃癌发病率位于第二位，死亡率位于第三位。全球每年新发胃癌100余万，死亡约80万，中国每年新发胃癌占全球的42％，死亡占35％，其发病率和死亡率均是世界平均水平两倍多。

胃癌起源于胃壁最表层的粘膜上皮细胞，可发生于胃的各个部位，可侵犯胃壁的不同深度和广度，胃癌的早期诊断和实时追踪胃癌细胞对胃癌的治疗至关重要。手术、化疗、放疗和生物靶向治疗是治疗恶性肿瘤的主要方法。

中国发明专利申请201110045024.5公开了一种胃部淋巴结清楚方法，包括先切开肝胃韧带，清扫第12组肝十二指肠韧带淋巴结，再由幽门上方清扫第5组幽门上区淋巴结，并切断、结扎胃右动、静脉，再沿膈肌脚、肝尾状叶下缘将小网膜内膜组织切开，沿顺时针方向绕至贲门区右侧，清扫第1组贲门右淋巴结及第3组胃小弯淋巴结，再沿胰腺上缘处切开胰腺被膜，至幽门下方，清扫第6组幽门下淋巴结，与幽门上区会合；再沿肝总动脉干表面依次清扫第7组胃左动脉旁、第8组肝总动脉旁、第9组腹腔动脉旁及脾动脉干淋巴结，从而完成淋巴结的清除。该技术首次提出了以“围歼式”的淋巴结清扫方法，并采取更合理的清除途径，大大简化操作步骤，提高可操作性，减少清除过程对周围组织的损伤，显著降低创面，提高作业的安全性。但是，单纯的手术治疗对于胃癌病人的疗效是有限的，晚期病人或术后复发或转移者的主要治疗手段是化疗和放疗。

随着胃癌分子生物学研究的不断深入，生物靶向治疗为胃癌的治疗开辟了新的途径。RNA干扰作为目前最为有效的基因沉默技术，在肿瘤的治疗中有着重大的应用前景，其能够特异性的阻断目标基因的表达，下调相应蛋白水平及功能，调控相关信号通路，从而抑制肿瘤生长、侵袭，具有分子特异性和选择性，能够专一性的杀灭肿瘤细胞，而对人体的正常组织没有损伤。然而裸露的小干扰RNA无保护，容易受机体内以及周围环境中的核酸酶的作用而降解，稳定性低，且因小干扰RNA具有过多阴离子而导致不能自由穿透细胞膜，达到靶组织时的剂量显著降低。因此，采用适当的递送系统将siRNA特异性的地送到靶细胞是siRNA治疗领域的挑战。因此发展一种安全、特异性的siRNA递送体系对于胃癌的治疗具有重大的意义。

Salih Gencer等人通过lipofectamin2000作为转染试剂将针对MMP-3基因的siRNA转入胃癌细胞株AGS中，有效的降低了AGS细胞的迁移以及浸润性(Journal of Gastrointestinal and Liver Diseases.2011Mar；20(1):19-26)。此外，WeiZhou等人通过慢病毒作为载体将Akt1基因的siRNA转入胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823中，体内和体外的研究表明胃癌细胞对药物顺铂的敏感性明显增强(Regulatory Peptides.2012Jun10；176(1-3):13-21)。上述两项技术中涉及的siRNA递送的载体lipofectamin2000和慢病毒在实际应用中受到lipofectamin2000较高的细胞毒性以及慢病毒潜在生物安全性的限制，尚难以实现在胃癌治疗中的得以应用。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种RNA纳米颗粒，生物相容性高，实现siRNA高效且特异性的递送。

本发明的另一个目的在于提供一种RNA纳米颗粒，针对BRCAA1基因的沉默可有效抑制人胃癌细胞的增值并诱导细胞凋亡。

本发明的再一个目的在于提供一种RNA纳米颗粒，将近红外染料标记的RNA纳米颗粒作为裸鼠胃癌皮下移植瘤模型的活体荧光成像的探针。

本发明的又一个目的在于提供一种RNA纳米颗粒，用于胃癌的防治。

本发明提供的一种RNA纳米颗粒，由a链RNA、b链RNA和c链RNA按碱基配对规则形成颗粒，其各自的序列分别为SEQ ID No.1、SEQ ID No.2和SEQ ID No.3，形成结构如下式Ⅰ所示