[发明专利]一种检测猪水泡病病毒的引物、检测试剂盒和制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测猪水泡病病毒的引物、检测试剂盒和制备方法。 

背景技术

猪水泡病是由小RNA病毒科（Picornaviridae）肠道病毒属（Enterovirus）的猪水泡病病毒（Swine vesicular disease virus , SVDV）引起的一种猪的急性高度接触性传染病，且该病流行性强、发病率高，严重的妨碍了猪产品的交流和国际贸易，并能造成严重的公共卫生问题，因此世界动物卫生组织（IOE）将其列为动物的A类传染病。该病可以引起感染动物舌部、口腔、蹄部和乳房出现水泡以及溃疡，并使患处丧失生产力，且该病很难在临床症状上和口蹄疫进行区别。该病于1966年首先在意大利发生，并且该病毒在两年后被提取和鉴定。随后又有许多国家和地区相继出现了此病，引起了国际肉食市场的混乱。因此，世界动物卫生组织于1973年专门召开会议，研究其防控措施，并制定了相关的条例，将该病正式定名为“猪水泡病”。该病依然存在于意大利地区，2006年意大利一些已无猪水泡病毒病毒的地区再次爆发了该病。随着我国加入世界贸易组织，猪以及产品进出口贸易的不断扩大，该病的防控和检疫问题显得尤为重要。 

传统检测病毒的方法主要有动物接种、病毒分离、血清学试验等，这些方法普遍存在耗时长、操作繁琐、灵敏度不高等缺点，特别是对于未见水泡只有疑似斑痕残留，或无明显症状的亚临床感染及康复动物是否带毒情况用传统方法很难准确判断(钟金栋,花群义, 夏雪山, 杨云庆,周晓黎,董俊. 猪水泡病病毒 RT-PCR 检测方法的建立.中国农学通报, 2006,22(12):25-27.)。目前，猪水泡病的检测大多都集中在酶联免疫吸附试验（ELISA）上。在R.M.Armstrong 等(Armstrong R M, Barnett T R. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection and quantification of antibodies against swine vesicular disease virus [J]. Journal of Virological Methods, 1989, 25:71~80.)建立了利用 ELISA 进行快速检测猪水泡病病毒的方法。Dekker 等(Dekker A, van Hemert-Kluitenberg F, Baara C, et al. Isotype specific ELISAs to detect anti- bodies against seine vesicular disease virus and their use in epidemiolog [J]. Epidemiol infect, 2002,128(2): 277~284.)建立了型特异性ELISAs (Isotype specific ELISAs)，用于监测猪群是否感染水泡病。E.Brocchi 等(Brocchi E, Berlinzani A, Gamba D, et al. Development of two novel monoclonal antibody- based ELISAs for the detection of antibodies and the identification of swine isotypes against vesicular disease virus[J]. Journal of Virological Methods, 1995, 52:155~167.)使用 MAC-ELISA 和Isotype-specific ELISA 两种方法来诊断猪水泡病，用MAC-ELISA对猪水泡病与口蹄疫、水泡性口炎进行鉴定，用Isotype-specific ELISA对猪水泡病感染的程度进行鉴定。以上的这些方法均是建立在 ELISA 技术的基础上，常规 RT-PCR对SVDV病毒的检测和特异性诊断进一步丰富、改进和提高了日常的诊断方法(Lin F, Mackay D K, Knowles N J. Detection of swine vesicular disease virus RNA by reverse transcription- polymerase chain reaction[J]. Journal of Virological Methods, 1997, 65:111~121)。