[发明专利]检测口蹄疫病毒和猪瘟病毒的基因芯片以及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测口蹄疫病毒和猪瘟病毒的基因芯片以及检测方法。

背景技术

口蹄疫(foot-and-mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性，热性，高度传染性疫病，主要特征是在口腔粘膜、蹄部、乳房、皮肤出现水疱，继而发生溃疡的一类传播速度极快的传染病。该病严重危害畜牧业生产，影响国际贸易和国家声誉，受到了各国政府的普遍关注，被国际兽疫局列为法定通报的动物传染病，我国将其列为一类重大动物疫病之首。FMD易感动物包括牛、绵羊、山羊、骆驼和猪等70多种家养和野生偶蹄类动物。该病曾在全球范围广泛流行，给世界养殖业造成巨大的经济损失。近年来，我国曾发生过O型、A型、Asia1型3个血清型的FMD疫情：2005年～2007年发生多起Asia1型口蹄疫疫情；2009年武汉、上海和北京发生A型FMD疫情；2009年和2010年在中国台湾与香港自治区相继发生O型FMD疫情，在2010年广东省广州市的白云区发生O型FMD疫情，至2010年末我国大陆的9个省的18个地方发生O型FMD疫情。此外，在健康牛群中发现有带毒情况。我国周边的印度、越南、阿富汗等国家FMD流行情况比较复杂，国外毒株多次传入我国，对我国FMD的防控造成巨大的威胁。FMD传染性强，危害巨大，快速、准确的诊断对FMD的防控具有重要意义。

猪瘟(Classical Swine Fever，CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病，可表现为急性、慢性、非典型或母猪繁殖障碍的病程，被世界动物卫生组织(OIE)列为须申报的动物疫病，我国将其列为一类传染病。近年来，一些已宣布消灭猪瘟的欧洲国家出现了猪瘟疫情的复发，2005年～2012年期间，共有46个国家和地区发生了猪瘟。总体上，猪瘟在我国得到了有效的控制，但该病在我国很多地方仍然广泛存在，其流行形式也以非典型CSF为主，此外，由于多种因素的影响，猪瘟疫苗免疫失败的现象较为普遍。对猪瘟的防控仍然是猪群疫病防控的重点之一。

口蹄疫(FMD)和猪瘟(CSF)可造成巨大的经济损失，对这2个病的防控是猪群疫病防控的重点和首要任务。对发病畜禽进行及时准确地诊断，大量开展动物疫病主动监测，掌握畜禽疫病的感染情况，是采取科学防控措施的前提和基础，也是提高动物疫病科学防控水平的必然要求；同时，通过监测，对病原学阳性动物进行净化，可有效降低野毒污染，促进畜禽健康。目前针对FMDV、CSFV的病原学检测方法已有很多报道，对每个病单独检测，费事、耗力，增加了检测成本。生产中迫切需要敏感性高、特异性强的高通量联合检测技术，以提高检测效率，有效降低劳动强度，节约检测成本。

公告号为CN1274849C的专利公开了同时检测口蹄疫病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因芯片，但是该文件中没有芯片的特异性和灵敏度试验，不能说明其可以特异且灵敏地同时检出口蹄疫病毒和猪瘟病毒。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种特异性强、灵敏度高、可同时检测口蹄疫病毒和猪瘟病毒的基因芯片和试剂盒。

本发明检测口蹄疫病毒和猪瘟病毒的基因芯片，它包括固相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO：5～7所示任意一个或者任意多个基因片段以及SEQ ID NO：8～11所示任意一个或者任意多个基因片段。

基因芯片，是指指通过不同方法将生物分子(寡核苷酸、cDNA、genomic DNA、多肽、抗体、抗原等)固着于硅片、玻璃片(珠)、塑料片(珠)、凝胶、尼龙膜等固相递质上形成的生物分子点阵，其突出的特点是微型化、集成化、平行化和高通量。

其中，所述基因芯片还包括阳性对照探针是SEQ ID NO：13所示的基因片段，阴性对照探针是SEQ ID NO：12所示的基因片段，定位探针是标记了荧光染料的SEQ ID NO：15所示的基因片段。

所述荧光染料是cy3荧光染料或cy5应该染料。

所述固相载体为醛基化玻片。

所述口蹄疫病毒是A型、O型或Asia1型口蹄疫病毒。

所述猪瘟病毒是野毒株或疫苗弱毒C株猪瘟病毒。

本发明检测口蹄疫病毒和猪瘟病毒的试剂盒，它包括前述的基因芯片与扩增口蹄疫病毒和猪瘟病毒基因的试剂；其中，扩增试剂包括SEQ ID NO：1～2和SEQ ID NO：3～4所示引物对。

所述引物对中，SEQ ID NO：1、3所示上游引物与SEQ ID NO：2、4所示下游引物的摩尔比为1:10。