[发明专利]一种狂犬病人免疫球蛋白制备工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种狂犬病人免疫球蛋白的制备工艺，属于生物制药领域。

背景技术

狂犬病是一种病原体为核糖核酸的弹性病毒，据世界卫生组织统计，全国三分之二以上的国家和地区有狂犬病流行，我国及东南亚地区处于世界狂犬病高发区，其病例约占全球70%以上，狂犬病一旦发病，目前尚无法医治，死亡率几乎达100%。如能及时提供足量的狂犬病人免疫球蛋白，使其患者血清中抗体达到0.5IU/ml 以上，可使患者得到有效保护。因此，对于治疗狂犬病的特效药狂犬病人免疫球蛋白的制备很有必要，而就目前抗狂犬病人免疫球蛋白的生产技术而言，国内市场上的产品多采用单一的低温乙醇分离工艺，分离步骤多，免疫球蛋白的收率低，导致国内狂犬病免疫球蛋白短缺。现有技术中如《高纯度狂犬病人免疫球蛋白及其原料生产方法》CN200710114839.8，所述方法为包括制备用于生产狂犬病人免疫球蛋白的抗体效价大于10IU/ml的原料血浆、低温乙醇分级分离、离子交换层析法纯化、低pH孵放灭活病毒处理、过滤除病毒、超滤、配液、除菌。获得的高纯度狂犬病人免疫球蛋白，含有高效价的狂犬病抗体，纯度超过98％，IgG单体和二聚体含量大于99％，狂犬病抗体效价大于等于150IU/ml，蛋白质含量小于120g/L。可以使患者得到有效保护，并可减少产品的用量及患者的痛苦和负担。

在免疫球蛋白市场仍处于短缺状况的现实下，为有效提取分离获得狂犬病人免疫球蛋白，特别是提高产品得率，获得安全可靠的产品，狂犬病人免疫球蛋白的制备工艺的进一步优化将具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高得率、高纯度的狂犬病人免疫球蛋白的制备工艺。

本发明是这样来实现的，一种狂犬病人免疫球蛋白制备工艺，它依次包括低温乙醇压滤法、层析法、超滤法、纳米过滤法和洗烘灌联动分装工艺技术提取分离免疫球蛋白，层析法为一步离子交换层析法，层析前先精制组分Ⅲ上清液，再对得到的精制组分Ⅲ上清液参数进行调整，将精制组分Ⅲ上清液的蛋白浓度调整至3～6%， pH至6.4～6.6，电导率在T=19℃时测为0.18～0.22s/m，调节好后用离子交换柱进行上柱层析纯化，层析使用DEAE Sepharose FF填料；层析完毕再调节pH为3.8～4.0。

其具体工艺方案如下：

（1）、将检疫期检疫合格的人血浆离心，离心出液温度控制在0~4℃；分离冷沉淀，冷沉淀用于Ⅷ因子生产，将其上清液输送至蛋白分离反应罐，使蛋白液的温度在1～3℃之间，缓慢加入pH4.0醋酸缓冲液调节pH值为6.70～7.20；加-15℃以下的95％或50％乙醇，使乙醇终浓度至8％（V/V），温度控制在-1～-3℃，加完乙醇后pH值为6.80～7.20；

（2）、将步骤（1）的制得物搅拌30min以上，进行离心，离心出液温度控制在-1～-3℃，离心得组分I沉淀和组分Ⅰ上清液；组分I沉淀存放于冷库或直接用于纤维蛋白原生产；

（3）、将步骤（2）的制得物组分I上清液加入pH4.0醋酸缓冲液中，调节pH值至6.7～6.9；加-15℃以下的95％乙醇至乙醇浓度为20％（V/V），温度控制在-4～-6℃；加完乙醇后pH应为6.80～7.00；搅拌120min以上后，静置60min以上，再开启搅拌，按每升反应液加入18g硅藻土，进行压滤，压滤得组分Ⅱ+Ⅲ沉淀和组分Ⅱ+Ⅲ上清液，组分Ⅱ+Ⅲ上清液用于人血白蛋白生产；

（4）、将步骤（3）的制得物组分Ⅱ+Ⅲ沉淀，加入10～15倍量的注射用水，用NaCl调整其钠离子浓度为0.01mol/L；开启搅拌，降温至3～5℃，将组分Ⅱ+Ⅲ沉淀倒入反应罐中搅拌溶解；在搅拌过程中缓慢加入pH4.0醋酸缓冲液到反应液中，调整pH为5. 80～5.85，反应液温度为0～-1℃，加完缓冲液，继续搅拌至少10min；开启制冷循环，加-15℃以下的95%乙醇，使反应液最终的乙醇浓度为19%；反应液最终温度控制在-4～-6℃，加完乙醇继续搅拌2h，静置4h以上进行压缩过滤；先用-4℃以下的压缩空气缓慢吹出滤器中的水，启动反应罐搅拌器，使硅藻土与反应液混匀10min以上边搅拌边过滤，在过滤过程中保持出液温度为-4～-6℃，过滤压力不超过0.2Mpa，收集精制组分Ⅱ+Ⅲ沉淀；