[发明专利]一种六环生物碱类化合物及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种六环生物碱类化合物及其制备方法与应用。    

背景技术

微生物代谢产物的种类很多，在菌体对数生长期所产生的产物，如氨基酸、核苷酸、蛋白质、核酸、糖类等，是菌体生长繁殖所必需的。这些产物叫做初级代谢产物；在菌体生长静止期，某些菌体能合成一些具有特定功能的产物，如抗生素、生物碱、细菌毒素、植物生长因子等。这些产物与菌体生长繁殖无明显关系，叫做次生代谢产物。次生代谢产物多为小分子化合物，但其化学结构类型多种多样，不同结构的次生代谢产物广泛具有抗炎症、抗菌、抗病毒、抗癌、扩张心血管、强心、平喘等多种生理活性，因而从微生物次生代谢中发现具有药用价值的先导性化合物得到了广泛的关注，并且药物生产已成为发酵工业的重要支柱。 

生物碱是存在于自然界（主要为植物，但有的也存在于动物）中的一类含氮的碱性有机化合物，有似碱的性质。大多数生物碱有复杂的环状结构，氮素多包含在环内。生物碱类化合物有显著的生物活性，是一类重要的药用成分。本发明从青霉属分枝青霉组固体发酵产物中分离得到一种具有显著抗烟草花叶病毒活性的六环生物碱类化合物；该化合物至今尚未见到相关报道。 

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种六环生物碱类化合物；第二目的在于提供所述的六环生物碱类化合物的制备方法；第三目的在于提供所述六环生物碱类化合物的应用。 

本发明的第一目的是这样实现的，所述的六环生物碱类化合物是以青霉属分枝青霉组(Penicillium ramigena，YNCA0361)菌株经发酵、浸膏提取、层析、纯化后得到，其结构式为： 

该化合物命名为：青霉菌生物碱A；

所述青霉属分枝青霉组(Penicillium ramigena，YNCA0361)菌株，菌株保藏编号为CGMCC No. 4824，保藏日期为2011年5月2日。

本发明的第二目的是这样实现的，包括以下步骤： 

A、固体发酵：将菌株在马铃薯葡萄糖琼脂培养基中于28℃培养7天，接种到含100ml马铃薯葡萄糖液体培养基的250ml锥形瓶中，于28℃下在转速180rpm旋转震荡的条件下培养5天，得到供发酵用的菌种，将其接种进行大规模固体发酵得到发酵产物；

B、浸膏提取：将发酵产物中加入固液体积比1.5~3的体积浓度60~80%醇溶剂提取1~3次，提取液再加入体积比1:0.5的乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯萃取部分经浓缩（蒸干乙酸乙酯）得到浸膏；

C、硅胶柱层析：浸膏用重量比2~5倍量的160~300目硅胶干法装柱进行硅胶柱层析，以1:0~0:1的氯仿-丙酮进行梯度洗脱，合并相同部分，收集各部分的洗脱液并浓缩；

D、高压液相色谱分离纯化：洗脱液的9:1部分进一步用高压液相色谱分离纯化即得目标物六环生物碱类化合物。

本发明的六环生物碱类化合物的结构通过以下方法测定。该化合物为黄色胶状物；比旋光度值 -52.6 (c 0.22, 甲醇); 紫外光谱 (甲醇) λ_max (log ε): 220 (4.17), 252 (3.42), 295 (2.18) nm; 圆二色谱 (CD) (c 0.12, MeOH) Δε₂₀₇ -35.6, Δε₂₂₅ +28.8; 红外光谱 (溴化钾压片) ν_max 3412, 3069, 2916, 1718, 1610, 1462, 1380, 1251, 1163, 1074, 922, 857 cm^-1; 电喷雾质谱(正离子模式) m/z 395 [M + Na]⁺; 高分辨电喷雾质谱(正离子模式) m/z 395.1212 [M + Na]⁺ (计算值395.1219).化合物的核磁共振碳谱和氢谱数据见表-1。由于化合物结构复杂，无法通过核磁共振确定其平面结构和构型，我们培养了单晶，并通过X-射线单晶衍射的方法确定了化合物的结构和绝对构型。