[发明专利]一种六环生物碱类化合物及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种六环生物碱类化合物，其特征在于所述的六环生物碱类化合物是以青霉属分枝青霉组(Penicillium ramigena，YNCA0361)菌株经发酵、浸膏提取、层析、纯化后得到，其分子式为C₁₉H₂₀N₂O₆，结构式为：

   

该化合物命名为：青霉菌生物碱A；

所述青霉属分枝青霉组(Penicillium ramigena，YNCA0361)菌株，菌株保藏编号为CGMCC No. 4824，保藏日期为2011年5月2日。

2.一种权利要求1所述六环生物碱类化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

A、固体发酵：将菌株在马铃薯葡萄糖琼脂培养基中于28℃培养7天，接种到含100 ml马铃薯葡萄糖培养基的250ml锥形瓶中，于28℃下在转速180rpm旋转震荡的条件下培养5天，得到供发酵用的菌种，将其接种进行大规模固体发酵得到发酵产物；

B、浸膏提取：将发酵产物中加入固液体积比1.5~3倍的体积浓度60~80%醇溶剂提取1~3次，提取液再加入体积比1:0.5的乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯萃取部分经浓缩得到浸膏；

C、硅胶柱层析：浸膏用重量比2~5倍量的160~300目硅胶干法装柱进行硅胶柱层析，以1:0~0:1的氯仿-丙酮进行梯度洗脱，合并相同部分，收集各部分的洗脱液并浓缩；

D、高压液相色谱分离纯化：洗脱液的9:1部分进一步用高压液相色谱分离纯化即得目标物六环生物碱类化合物。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于A步骤中所述的马铃薯葡萄糖培养基取200 g马铃薯切成小块，加水煮烂，即煮沸20~30分钟，能被玻璃棒戳破即煮马铃薯块即可，用八层纱布过滤，加热，再加5 g琼脂，继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完后，加入20 g 葡萄糖，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升，分装试管或者锥形瓶，加塞、包扎， 121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面或者摇匀，冷却后贮存备用。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于A步骤中所述的大规模固体发酵是将供发酵用的菌种在500 mL锥形瓶中进行，每个锥形瓶中含100 g 大米和120 mL的水，高温消毒灭菌后接种上菌种；每批发酵50瓶，在25 ℃下发酵45天。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于B步骤中所述的醇溶剂为甲醇或乙醇。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于C步骤中所述的浸膏在经硅胶柱层析粗分前，还包括将浸膏用重量比1.5～3倍量的纯甲醇或纯乙醇或纯丙酮溶解后，用重量比1.0～2.0倍的80～100目硅胶拌样。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于C步骤中所述的氯仿-丙酮溶液体积配比为1:0、9:1、8:2、7:3、6:4、1:1和0:1。

8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于D步骤中所述的高压液相色谱分离纯化是采用21.2 mm × 250 mm，5 μm的C18色谱柱，流速为12 mL/min，流动相为60%的甲醇，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样200 μL，收集22.5 min的色谱峰，多次累加后蒸干。

9.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于D步骤中所述高压液相色谱分离纯化后，所得化合物再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用凝胶柱层析分离，以进一步分离纯化。

10.一种权利要求1所述的六环生物碱类化合物的应用，其特征在于所述的六环生物碱类化合物在制备抗烟草花叶病毒药物中的应用。