[发明专利]一种杀真菌链霉菌发酵生产恩拉霉素的培养基和补料方法

权利要求书

1.一种杀真菌链霉菌发酵生产恩拉霉素的培养基，包括种子培养基和发酵培养基，其特征在于所述种子培养基组成为：玉米油15～20ml/L、α-乳糖5～10g/L、乳糖酶0.01～0.03g/L、配方鱼粉20～25g/L、啤酒酵母干渣15～20g/L、玉米浆干粉10～15g/L、蚯蚓粉5～10g/L、硫酸铵0.2～0.5g/L、轻质碳酸钙1～5g/L；

所述发酵培养基组成为：玉米油20～30ml/L、α-乳糖20～25g/L、乳糖酶0.02～0.05g/L、配方鱼粉30～40g/L、啤酒酵母干渣15～20g/L、玉米浆干粉15～20g/L、蚯蚓粉10～15g/L、硫酸铵0.3～0.7g/L、轻质碳酸钙1～5g/L、硫酸镁0.03～0.06g/L、硫酸锌0.02～0.04g/L、磷酸二氢钾0.5～0.9g/L、氯化钠0.3～0.7g/L、氯化钾0.2～0.5g/L、表面活性剂1.5～2.5g/L、氧载体4～7g/L；

所述配方鱼粉是由鱼粉、骨粉和羽毛粉按照重量比7:3:1混合而得；

所述氧载体为吐温80或全氟化碳；

所述表面活性剂为聚氧乙烯烷基醇酰胺或甘油酯或聚甘油酯或聚乙二醇硬脂酸酯或十八烷基二羟乙基氧化胺。

2.一种利用权利要求1所述的培养基发酵生产恩拉霉素的补料方法，其特征是：在发酵过程中采用流加法进行补料，补料包括补培养基、补水、补硫酸铵、pH控制和补氨基酸，其中

a 补培养基：

发酵前70h不用进行补料，

发酵时间在71～90h，按照发酵培养基配方补碳源和氮源，其补入量为发酵培养基总体积的3～5%，

发酵时间在110h～130h，按照发酵培养基配方补碳源和氮源，其补入量为发酵培养基总体积的2～4%，

发酵时间在150h～180h，按照发酵培养基配方补碳源和氮源，其补入量为发酵培养基总体积的1～2%；

b 补水：

发酵前80h不用进行补水，

发酵时间在81～160h，当菌体浓度高于55%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在50～55%，每隔6～8h检测发酵液菌体浓度，

发酵时间在161h～发酵结束，当菌体浓度高于50%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在40～50%，每隔6～8h检测发酵液菌体浓度；

c 发酵过程pH控制工艺：

发酵前80h，pH不进行控制，

发酵时间在81～100h，若pH＜6.5，加入10～20%的氢氧化钠，调节pH至6.6～6.9；若pH＞7，加入20%的硫酸铵溶液，调节pH至6.6～6.9，

发酵时间在101～180h，若pH＜6.2，加入10～20%的氢氧化钠，调节pH控至6.3～6.6；若pH＞6.6，加入30%的硫酸铵溶液，调节pH至6.3～6.6；

d 补入氨基酸：

发酵前80h，不用补入氨基酸，

发酵在81h、130h和170h分别补入浓度为0.2～0.5mg/L的丝氨酸、半胱氨酸和精氨酸，其补入量为发酵液体积的0.1～0.3%；

e 补硫酸铵：

在发酵的80h、150h和220h，分别补入30%的硫酸铵溶液，其用量控制在发酵液体积的0.05～0.1%。