[发明专利]一种利用抗原量梯度生产羊抗Cys-C多抗血清的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种羊抗人血清生产方法，具体涉及一种利用抗原量梯度生产羊抗Cys-C多抗血清的方法。

背景技术

Cys-C.是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂,也被称为γ-微量蛋白及γ-后球蛋白，广泛存在于各种组织的有核细胞和体液中,是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，分子量为13.3KD,由122个氨基酸残基组成,可由机体所有有核细胞产生，产生率恒定。

Cys-C是生物试剂的重要原料，现有的生产方法采用传统的免疫方式，产量与效价较低，已无法满足日益增长的使用需求。

发明内容

发明目的：为了克服上述现有技术的不足，本发明提供一种可提高产量与效价的利用羊生产抗Cys-C多抗血清的方法。

技术方案：为解决上述技术问题，本发明提供的是一种利用抗原量梯度生产羊抗Cys-C多抗血清的方法，包括以下步骤：

1)免疫原乳剂的制备，将含有Cys-C抗原4mg的血清0.1ml，无菌PBS1.9ml，弗氏佐剂2ml混合并乳化，得到免疫原乳剂；

2)羊免疫第一针，在羊的前后腹股沟，每腹股沟分2个区域注射，总共12个注射点，皮下注射，颈部两侧2个注射点平均注射；

3)与步骤2)间隔二十天注射第二针，前后腹股沟分2个区域注射，总共12个注射点，颈部两侧淋巴结左右2个点；

4)与步骤3)间隔十天注射第三针，前后腹股沟分2个区域注射，总共12个注射点；

5)与步骤4)间隔十天注射第四针，前后腹股沟分2个区域注射，总共12个注射点；

6)与步骤5)间隔十天注射第五针，前后腹股沟分2个区域注射，总共12个注射点；

7)与步骤6)间隔十天注射第六针，前后腹股沟分2个区域注射，总共12个注射点；

8)与步骤7)间隔十天注射第七针，前后腹股沟分2个区域注射，总共12个注射点；

9)与步骤8)间隔十天注射第八针，前后腹股沟分2个区域注射，总共12个注射点10)与步骤9)间隔十天注射第九针，前后腹股沟分2个区域注射，总共12个注射点

11)与步骤9)间隔七天对免疫的羊动脉采血，血液放入水箱中1小时温度40℃，待血清充分析出，经离心沉淀分离出抗血清，放进冰箱保存温度在4℃—8℃之间；

12)对步骤9)所得抗血清进行效价测定。

作为优选，所述步骤2)中注射的免疫原乳剂乳化时采用的弗氏佐剂是弗氏完全佐剂。

作为优选，所述步骤3)～9)中注射的免疫原乳剂乳化时采用的弗氏佐剂是弗氏不完全佐剂。

作为优选，所述步骤2)抗原量为2头羊4mg；所述步骤3)抗原量为2头羊8mg；所述步骤4)抗原量为2头羊16mg；所述步骤5-9)抗原量为2头羊20mg；

作为优选，所述步骤10)的效价测定采用的方法为琼扩方法。

有益效果：本发明将Cys-C抗原经皮下注入山羊腹股沟外并进行多次加强免疫，使其产生高效羊抗Cys-C抗体效价可达1:16以上。为生物试剂厂提供原料、为医疗诊断提供方便，使山羊产生了高的效益。

具体实施方式

实施例：实验动物选用山羊公羊10只，体重35公斤左右健康羊，免疫前全部打上耳标，羊群采用圈养，结合放养，保持正常体况，避免羊只过肥，提高免疫力，自动饮水器，每天牧草供给，适量添加精料、醋糟、麸皮和维生素等。

人的APOB接种0.1ml(合抗原4mg)1.9ml无菌PBS完全弗氏(或不完全)佐剂2ml制成免疫原乳剂备用。

山羊免疫第一针，前后腹股沟，每腹股沟分2个区域注射，总共12个注射点，皮下下注射，颈部两侧2个点平均注射。

第二针、间隔二十天，前后腹股沟分2个区域注射，总共12个注射点，颈部两侧淋巴结左右2个注射点。

第三针、间隔十天，前后腹股沟分2个区域注射，总共12个注射点。

第四针、间隔十天，前后腹股沟分2个区域注射，总共12个注射点。

第五针、间隔十天，前后腹股沟分2个区域注射，总共12个注射点。

第六针、间隔十天，前后腹股沟分2个区域注射，总共12个注射点。

第七针、间隔十天，前后腹股沟分2个区域注射，总共12个注射点。

第八针、间隔十天，前后腹股沟分2个区域注射，总共12个注射点。

第九针、间隔十天，前后腹股沟分2个区域注射，总共12个注射点。

其中第一针即第一次免疫注射的免疫原乳剂乳化时采用的弗氏佐剂是弗氏完全佐剂。