[发明专利]人副流感病毒量子点免疫层析分型检测卡及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，具体为一种人副流感病毒量子点免疫层析分型检测卡及其制备方法和应用。

背景技术

人副流感病毒(humanparainfluenzavirus，HPIV)是儿童急性呼吸道感染的重要病原体，主要经飞沫传染，亦可通过眼、口或鼻的粘膜接触进行传播，发病率以婴幼儿最高。HPIV感染呈全球性分布，是常见的社区获得性呼吸道感染的病原，HPIV感染在小儿儿童急性呼吸道感染的发生率高达30-40％，其是导致小儿下呼吸道严重感染的、仅次于呼吸道合胞病毒的病原体。该病原体首先发现于上世纪50年代末，原名仙台病毒，最初从日本仙台市一例死于肺炎的患儿肺液中分离出来。根据遗传学和血清学人副流感病毒可分为4型，其中1-3型在临床中最为常见，每种亚型主要的结构和生物学特征相似，但流行病学和所引发疾病的临床特征有差异。人副流感病毒1型以及2型所导致的相关疾病主要有义膜性喉炎、上呼吸道和下呼吸道感染；人副流感病毒3型主要导致细支气管炎及肺炎；人副流感病毒4型在临床上不多见，一般仅导致轻微感染。

临床病人由于不同的呼吸道病原体(如人副流感病毒、流感嗜血杆菌、流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等)感染引起疾病症状可以十分相似，这导致了流行诊断比较困难，确诊往往依赖于实验室诊断。快速及有效的诊断方法应该是在疾病的发病初期就可以得到明确的诊断，便于实施针对性的治疗，阻止病情的发展迁延。

尽管人副流感病毒在全球范围内传播，婴幼儿的感染尤其普遍，但可用于实验室诊断的标准化商品试剂的种类极少。目前，人副流感病毒的检测主要有以下几种方法：

1、常规实验室检测

1.1)病毒分离

实验室诊断人副流感病毒的金标准是分离人副流感病毒毒株。采用鼻咽分泌物作为病毒分离的标本，可以用LCC-MK2细胞培养的方法分离病毒。但是该方法费时费力，通常需要一周才能得到最终结果，在临床方面对病人的治疗就有一定的局限性。

1.2)血清学检测

即采用酶联免疫法、胶体金免疫法、微量免疫荧光法和间接血凝试验等，检测被检者血清中HPIV抗体水平，可间接提示HPIV感染的存在。然而，血清学试验只能提供一种回顾性的诊断，需要同时检测患者急性期和恢复期的双份血清，如果恢复期中抗人副流感病毒抗体效价比急性期高4倍或4倍以上才有诊断意义。另外，抗体出现的时机不易掌握，儿童、青少年与成人之间又存在HPIV特异性抗体的差异，并且，据报道患儿IgM的检出率大约只有50％，故现有血清学方法的检测质量受到一定限制。

2、快速诊断

直接检查人副流感病毒蛋白抗原和病毒核酸可达到快速诊断的目的，目前主要有免疫荧光法、免疫酶法和PCR法等。免疫荧光法和免疫酶法均不能进行一步检测，均存在操作步骤复杂，需要专业人员操作，检测时间长(2h以上)，成本较高等缺点。PCR法具有快速、灵敏以及特异的优点，是目前研究HPIV感染的重要手段，但由于PCR对实验设备以及操作要求较高，且易出现假阳性，在我国还不能作为常用的临床诊断方法。因此，建立“一步法”HPIV特异性抗原快速分型诊断法十分必要。

发明内容

本发明针对背景技术中现存的几种人副流感病毒在检测方式中遇到的技术瓶颈，提出了一种具有操作简便、检测快速、可定量及高灵敏度等优点的人副流感病毒量子点免疫层析分型检测卡及其制备方法和应用。

本发明的目的是通过以下技术手段来实现的：

一种人副流感病毒量子点免疫层析分型检测卡，其特征在于：所述人副流感病毒量子点免疫层析分型检测卡包括底板、样品垫、结合垫、检测层以及吸水垫；所述结合垫包被有量子点分别标记的兔抗I型、II型以及III型人副流感病毒HN蛋白多克隆抗体的混合物；所述检测层是由带有第一检测线、第二检测线、第三检测线以及质控线的固相硝酸纤维素膜构成；所述第一检测线、第二检测线以及第三检测线分别包被有鼠抗I型、II型以及III型人副流感病毒多克隆抗体；所述质控线包被有抗兔IgG；所述检测层粘贴在底板上；所述结合垫以及吸水垫分别设置在检测层两端部的上方且与检测层部分重叠后分别与检测层以及底板粘贴在一起；所述样品垫设置在结合垫上方且与结合垫部分重合后分别与结合垫及底板粘贴在一起。

作为优选，本发明所采用的量子点是羧基化两亲聚合物修饰的水溶性CdSe/ZnS量子点。

作为优选，本发明所采用的抗兔IgG包括但不限于羊抗兔IgG。