[发明专利]检测血液中微生物的方法

说明书

本发明提供一种检测血液中微生物的方法，该方法包括下列步骤：(1)将2,3,5‐三苯基氯化四氮唑(TTC)直接加入血培养瓶；或2,3,5‐三苯基氯化四氮唑混合到硅橡胶富氧膜中，制备成固体指示剂，并固定在血培养瓶底部；所述TTC浓度为0.01‐0.03g/mL；(2)向血培养瓶中加入血培养基，并于121℃，灭菌20min；(3)向血培养瓶中加入血液样品，在35℃条件下培养0‐5天后；(4)检测血培养瓶中指示带的光反射强度，绘制光反射强度曲线，根据光反射强度曲线确定微生物生长结果。本发明在临床应用上具有成本低、操作流程简单、检测时间短、阳性检出率高等优点，有较大的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物技术，具体微生检测方法，尤其涉及一种检测血液中微生物的方法。

背景技术

血培养是临床实验室重要的检测项目之一，由于菌血症、败血症的死亡率高达30-50％，因此，准确及时的培养结果对临床检测和治疗有重要意义。目前中国内血培养中细菌的阳性检出率仅为10％，其可能原因为：1、血液中的含菌量低；2、血液中的抗菌物质；3、抗生素的应用；4、培养条件的限制。目前市场上的血培养检测产品主要以CO₂检测法为主，主要的测定技术有放射性标记技术、荧光检测技术和分光光度技术。因细菌在其生长代谢过程中会产生CO₂，这些技术的原理都是通过检测血液样品在培养过程中中是否有CO₂的产生来判定血液中是否有微生物。但这种基于细菌产生CO₂的检测方法，会因为一些不能利用糖代谢的微生物(如非发酵菌)，其代谢过程不产生CO₂或产生的CO₂量极低，从而导致测定结果呈阴性。

2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)作为一种特殊的氧化还原指示剂，可以捕捉细胞或细菌呼吸过程中产生的电子，从无色的氧化型变成紫色的还原型，从而可以检测出血液中不产生CO₂的微生物。用TTC作指示剂有阳性检出率高，检出时间短的优点，对于提高血培养技术有重要帮助。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于研究设计采用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)作为一种特殊的氧化还原指示剂来检测血液中是否含有微生物，达到提高血培养技术的效果。

本发明提供一种检测血液中微生物的方法，该方法包括下列步骤：

(1)将2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)与血培养基加入血培养瓶，再加入35-40mL血培养基及2-4g树脂粒，所述2,3,5-三苯基氯化四氮唑在血培养基及树脂粒混合物中浓度为0.01-0.03g/mL；或

2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)混合到硅橡胶富氧膜中，制备成固体指示剂，并固定在血培养瓶底部，再加入35-40mL血培养基及2-4g树脂粒；所述2,3,5-三苯基氯化四氮唑在硅橡胶富氧膜中浓度为0.01-0.03g/mL；

(2)血培养瓶于121℃，灭菌20min；

(3)向血培养瓶中加入血液样品，在34-36℃条件下培养0-5天；

(4)检测血培养瓶中指示带的光反射强度，绘制光反射强度曲线，根据光反射强度曲线确定微生物生长结果。

本发明方法所述步骤(1)硅橡胶富氧膜为：25mL的聚二甲基硅氧烷、750μL正桂酸乙酯、100μL二月桂酸二丁基锡和1.25mL环己烷混合物。

所述步骤(1)TTC先用等质量的单蒸水溶解再应用。