[发明专利]一种基于山奈酚3,4’-双-O-β-D-葡萄糖苷含量鉴别蜂花粉的方法

说明书

技术领域

本发明涉及蜂花粉的鉴别方法，具体涉及一种基于山奈酚3,4’- 双-O-β-D-葡萄糖苷含量鉴别蜂花粉的方法。

背景技术

蜂花粉是蜜蜂从蜜源植物的雄蕊中采集的花粉，加上蜜蜂自身的 腺上分泌物、唾液和花蜜形成的不规则扁圆形的团状物。

蜂花粉含有多种氨基酸、维生素、矿物元素、不饱和脂肪酸、有 机酸、蛋白质、脂类、碳水化合物，多酚类和黄酮类物质、多糖、酶 类、核酸、激素等活性物质，具有丰富的营养价值。蜂花粉因其成分 多样而富有多种活性功能，不仅对治疗贫血有特殊的疗效，对于治疗 前列腺疾病也有较好的疗效；还具有抗癌、抗辐射、降血脂、防治心 脑血管疾病的作用；此外，蜂花粉对于治疗习惯性便秘、胃肠病、肝 病、神经衰弱均有功效；同时，蜂花粉对保护皮肤和美容有明显的作 用，可除去多余的脂肪达到减肥美体的目的，其提取物还具有保湿、 抗氧化、调理皮肤和头发的功效(孙丽萍，田文礼，朱晓丽等.蜂花 粉功能食品的研究思路.中国养蜂，2006，57(10):39-40)。

蜂花粉中各成分的含量如下：蛋白质20-25％、碳水化合物 40-50％、脂肪5-10％、矿物质2-30％、木质素10-15％、未知物质10-15％， 黄酮类物质是蜂花粉中重要的功效组分，也是保健食品中的有效成 分。

目前一些不法商家将价格较低的蜂花粉掺入价格较高的蜂花粉 中赚取高额利润，但是由于大多数的蜂花粉颜色，味道非常相近，所 以很难对市场的蜂花粉进行鉴别。通常根据植物来源对蜂花粉进行分 类，所以不同蜂花粉之间的营养成分和生物学功能均存在一定差异。

已有的研究报道中鉴别花粉品种的方法为：感官检验，显微镜镜 检，比色法、紫外分光光度法、高效液相色谱-大气压电离质谱法 (LC-TSP-MS)、胶束毛细管电泳法(MECC)和高效液相色谱法 (HPLC)。其中：

感官检验主要通过眼看蜂花粉的颜色和品尝味道来鉴别种类，但 是很多蜂花粉颜色差异比较小乃至肉眼很难分辨，不同的人观察后也 会认为是不同的颜色；一些种类的蜂花粉均具有微甜的味道，很难通 过品尝分辨其种类，所以该方法最大的缺点是鉴别能力的准确度低， 容易受人为因素的影响；

在电子显微镜下来源于不同植物的花粉大小和形状存在一定的 差异，因此，可以通过显微镜下的轮廓图鉴定植物的种类。但是在显 微镜下很多蜂花粉的形态非常接近，这容易造成鉴别方法主观性强， 准确性低；

比色法是在碱性溶液中加Al³⁺与3-羟基黄酮、5-羟基黄酮进行络 合反应，利用颜色和含量关系进行比色测定的方法，该法用于组成单 一的标准对照物时，结果准确，但当应用于组分复杂的植物试样时， 比如花粉黄酮提取液，由于受到花色素、鞣酸及其它酚性成分等多种 物质的干扰，而且底液常常出现浑浊现象，因此测定结果明显偏高， 而且测定结果重现性不好。

紫外分光光度法：是利用黄酮类化合物在紫外区有较强吸收，利 用适当的对照品进行黄酮的测定。为了消除一些水溶性的强极性物质 的干扰，将样品用聚酰胺进行了分离提纯，再采用紫外分光光度法测 定，此为聚酰胺-紫外分光光度法。

高效液相色谱法：一种方法是采用样品直接进样，梯度洗脱，高 效液相色谱分析，测定样品所含黄酮苷类成分，但是由于黄酮苷类种 类多，不可能一次分离，而且很多都没有标准对照物可对照，很难定 量；另一种方法是通过测定水解苷元含量来计算黄酮苷的量，其测定 原理是：蜂花粉黄酮主要成分是以黄酮苷形式存在，经酸水解后生成 黄酮醇类化合物，其主要是槲皮素、异鼠李素和山奈酚三种成分，， 用HPLC分离测定这三种苷元的含量，再用计算方式转换成相应蜂花 粉黄酮苷的含量。

利用薄层色谱法可分离分析蜂花粉中的维生素，由斑点的数目、 形状、颜色、荧光及Rf值比较，从而鉴别蜂花粉种类(杨梦兰，李忠 奇，王伟等.TLC法鉴别花粉种类，广东公安科技，2000，3：16-19)， 但是该方法中使用了大量的具有挥发性的有毒有害试剂，如氯仿，冰 醋酸，二氯甲烷和氨水等，而且根据Rf值和颜色鉴别也具有主观性强， 准确性低等缺点。