[发明专利]一株共表达L-乳酸脱氢酶和甲酸脱氢酶的大肠杆菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.一株共表达L-乳酸脱氢酶和甲酸脱氢酶的大肠杆菌，其特征在于，它是导入了来源于凝结芽孢杆菌的L-乳酸脱氢酶基因ldhL和来源于博伊丁假丝酵母的甲酸脱氢酶基因fdh的大肠杆菌；

其中，所述的L-乳酸脱氢酶基因ldhL，其核苷酸序列的GenBank登记号为KF386111；所述的甲酸脱氢酶基因fdh，其核苷酸序列的GenBank登记号为AJ011046。

2.权利要求1所述的共表达L-乳酸脱氢酶和甲酸脱氢酶的大肠杆菌的构建方法，其特征在于，将来源于凝结芽孢杆菌的L-乳酸脱氢酶基因ldhL和来源于博伊丁假丝酵母的甲酸脱氢酶基因fdh分别克隆到大肠杆菌表达载体pETDuet-1的多克隆位点1和多克隆位点2处，得到重组质粒pETDuet-ldhL-fdh，将该质粒转化大肠杆菌Escherichia coli BL21，利用氨苄青霉素平板筛选得到阳性转化子，即得到重组大肠杆菌E.coli BL21(pETDuet-ldhL-fdh)。

3.权利要求1所述的共表达L-乳酸脱氢酶和甲酸脱氢酶的大肠杆菌在催化制备L-苯乳酸中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，它包括如下步骤：

(1)细胞的准备：将重组大肠杆菌按体积比为0.1～3％的量转接到发酵培养基中，当细胞OD₆₀₀达到0.4～0.8后，加入终浓度为0.1～1mmol/L的IPTG，在16～30℃继续培养1～12h，培养结束后，收集重组大肠杆菌；

(2)催化方法：将步骤(1)中得到的重组大肠杆菌加入含有苯丙酮酸和甲酸钠的反应体系中，在20～70℃条件下反应5min～10h催化制备L-苯乳酸。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(1)中，所述的发酵培养基为蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L，氨苄青霉素100mg/L。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(2)中，重组大肠杆菌的干菌添加量为1～36g/L。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(2)中，所述的反应体系，其苯丙酮酸的初始浓度为1～100mmol/L。

8.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(2)中，所述的反应体系，其甲酸钠的初始浓度为1～200mmol/L。

9.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(2)中，所述的反应体系，其初始pH值为5～7.5。