[发明专利]薄层色谱法半定量测定氨基甲酸乙酯的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测氨基甲酸乙酯含量的方法，具体涉及薄层色谱法半定量测定氨基甲酸乙酯含量的方法。

背景技术

氨基甲酸乙酯 (Ethyl Carbamate，简称EC)是一种具有潜在致癌作用的化合物，可导致肝癌、皮肤癌、肺癌和淋巴癌等疾病，是发酵食品和酒精饮料的伴随产物。EC早在1943年就被证实为致癌物质。1976年，Ough（Ough C S. Ethyl carbamate in fermented beverages and foods. Ⅱ. Possible formation of ethyl carbamate from diethyl dicarbonate additionto wine [J]. Agric FoodChem, 1976, 24(2): 328-331.）发现在酒精饮料中含有EC。研究表明，对啮齿类动物，EC是一种多位点致癌物，并且乙醇（酒精）对其致癌性有促进作用。2007年，国际癌症研究所把EC对人类的致癌毒性由2B组（或可能令人类患癌的物质）改为2A组（可能令人类患癌的物质）。目前氨基甲酸乙酯的污染，被认为是食品中继黄曲霉毒素之后的又一重要问题，我国尚未制定酒精饮料和发酵食品中氨基甲酸乙酯的限量标准。

自发酵酒精饮料中发现EC以来，国内外都致力于简便、快速、准确的EC含量检测方法研究，样品的前处理方法及检测方法都在不断改进。目前国内外对酒精饮料中EC的仪器分析检测方法有气相色谱法、气相色谱-质谱法、液相色谱法、液相色谱-质谱法、薄层色谱法、傅立叶变换红外光谱法等，其中最常用的是气相色谱-质谱法。上述检测方法准确度高，但存在仪器设备昂贵、前处理方法复杂、人员专业技术要求高、检测成本高等缺点。因此，建立简便、快捷、准确的检测方法成为了酒精饮料中EC检测迫切需要解决的重要内容。

薄层色谱具有操作简单、快捷、灵敏度高和准确可靠等特点，广泛应用于食品营养，合成药物和药物代谢，医学和临床，毒物分析和法医化学，农残检测等。对于使用薄层色谱法检测氨基甲酸乙酯，国内外报道并不多见。国内的纳新力（纳新力,陈介华,代海香.酒中氨基甲酸乙酯的薄层分析[J].卫生研究,1991,20(6):45-46.）运用薄层色谱法在365nm下直接展开，方法的检测限为10mg/L，国外的Eugenie Jaryj（Eugenie Jaryj, Klemens Lorenz, Spangenberg B. A Simple Method for the Quantification of Urethane in Spirits[J]. Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies. 2008, 31: 1969-1976.）使用薄层色谱法，展开后与EC衍生剂反应，结果可见蓝色荧光点。

本发明提供一种用于快速检测氨基甲酸乙酯的方法。该法基于Eugenie Jaryj的研究，经过改进后可以使用更加廉价的薄层板，经展开后与肉桂醛衍生剂反应，结果可在普通紫外分析仪365nm,Rf值为0.85处观察到绿色荧光点，薄层板的最低载药量为50ng的氨基甲酸乙酯。如果按照酒中氨基甲酸乙酯5mg/L的限定标准，则本发明可以直接检测出2.5mg/L的EC（薄层板的点样量一般最大为20μL），因此本发明能够快速、简单、廉价检测出至少2.5mg/L的氨基甲酸乙酯。

发明内容

本发明提供薄层色谱法半定量测定氨基甲酸乙酯的方法。以肉桂醛、磷酸混合液做荧光衍生剂，以甲基叔丁基醚、石油醚、甲醇混合液为流动相展开剂，薄层色谱板为固定相，经薄层展开的氨基甲酸乙酯与荧光衍生剂反应后，在紫外分析仪（365nm处，暗环境）可肉眼观察到绿色的氨基甲酸乙酯荧光斑点，Rf值固定；

具体步骤为：

（1）取出薄层硅胶板于105℃~110℃烘箱内活化半小时，放入干燥器中备用；

（2）配制展开剂，搅拌后倒入双槽薄层色谱展开缸中，静置0.5~1小时，使之饱和；

（3）配制荧光衍生剂溶液：将肉桂醛，丙酮，磷酸混合，搅拌后备用；

（4）在距薄层硅胶板下端1cm处点样，于同一侧面上距薄层硅胶板上端2cm处铅笔标记作为展开前沿线，点样样品为至少含有50ng的氨基甲酸乙酯待测液；

（5）在薄层展开缸中展开，展开剂到达展开前沿线后取出，晾干；

（6）将晾干后的薄层板浸于荧光衍生剂中后取出，之后再在烘箱反应5—20分钟；