[发明专利]甲基化DNA富集试剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种甲基化DNA富集试剂，其特征在于：甲基化DNA富集试剂是由甲基化结合蛋白和带有镍配基的凝胶或磁珠合成的甲基化结合蛋白凝胶或甲基化结合蛋白磁珠。

2.如权利要求1所述的甲基化DNA富集试剂，其特征在于：所述的带有镍配基的凝胶是金属镍螯合琼脂糖凝胶；所述的镍配基的磁珠是琼脂糖镍磁珠。

3.如权利要求1或2所述的甲基化DNA富集试剂，其特征在于：甲基化DNA富集试剂中含有稳定剂，所述的稳定剂包含PPG或Tween20。

4.如权利要求1或2所述的甲基化DNA富集试剂，其特征在于：所述的甲基化结合蛋白的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

5.权利要求4所述的甲基化DNA富集试剂的制备方法，其特征在于方法如下：

1)按SEQ ID NO.1所示的DNA序列，人工合成甲基化结合蛋白基因，将得到的基因插入到载体质粒中，构建甲基化结合蛋白表达质粒，将质粒转入大肠杆菌感受态细胞中，得到重组大肠杆菌；

2)将菌体细胞经溶菌酶裂解30分钟后，超声波破碎，离心，得到含有甲基化结合蛋白的裂解液，加入金属镍螯合琼脂糖凝胶或琼脂糖镍磁珠，混合并在4℃孵育2小时，1000转/分钟离心，除去上清液，并用10ml 50mM Tris-HCl pH7.5，150mM NaCl缓冲液洗两次，每次用1000转/分钟离心，最后以1ml的50mM Tris-HCl pH7.5，150mM NaCl缓冲液悬浮带有甲基化结合蛋白的凝胶，制得甲基化DNA富集试剂。

6.权利要求1或2所述的甲基化DNA富集试剂在富集尿液中甲基化DNA的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于方法如下：

1)取尿样，3000转/分钟，取上清液；

2)向50ml上清液中加入甲基化DNA富集试剂10微升，于4-25℃下振荡保温1h；

3)1000转/分钟离心，除去上清液，以1ml的50mM Tris-HCl pH7.5，150mM NaCl缓冲液将甲基化结合蛋白凝胶转移到离心管中，离心除去上清液，即得富集了尿样中甲基化DNA的甲基化结合蛋白凝胶。

8.权利要求1或2所述的甲基化DNA富集试剂在甲基化DNA富集试剂盒中的应用。