[发明专利]林蛙提取混合液及其在治疗及预防脚气的药物中的用途

说明书

技术领域

本发明属于医学生物制药技术领域，具体涉及一种林蛙提取混合液及其在制备治疗及预防脚气的药物中的用途。

背景技术

脚气，是一种极常见的皮肤病。成人中70～80％的人患有脚气，只是轻重不同而已。常在夏季加重，冬季减轻，也有人终年不愈。致病菌多系毛癣菌属与表皮癣菌种，主要菌种有红色毛癣菌、石膏样毛癣菌、絮状表皮癣菌、玫瑰色毛癣菌。脚气不易治愈的主要原因除去这些真菌有较强的耐药性之外，在治疗过程中，病患处的湿润、厌氧环境又是其剩余真菌的有力温床；同时患者体内含有真菌，当外用停止给药时，体内的真菌可继续繁殖，导致了脚气的反复发作，很难根治。

目前，国内对林蛙皮抗菌肽进行了研究，申报的专利也在增多，以林蛙为关键词，检索国内外专利，没有查到国外关于林蛙的专利，国内专利中CN1216768A“生物抗菌肽及其制备方法”是涉及一种具有广谱抗菌活性的林蛙蛙皮生物抗菌肽及其制备方法；CN1583166A“林蛙抗菌肽喷雾剂及其制备方法”、CN1583165A“林蛙抗菌肽凝胶剂及其制备方法”是涉及保护林蛙皮肤抗菌肽以喷雾剂和凝胶剂两种形式用于临床皮肤感染、烧伤烫伤感染领域；CN1679632A“林蛙镇痛水提物及其制备方法及其制备方法”是关于保护从林蛙皮中提取的一种具有镇痛作用的林蛙镇痛水提物及其制备技术。均是以林蛙皮为原料，提取了林蛙皮抗菌肽。CN103073628A一种利用超声波从林蛙体中提取抗菌肽的生产制备方法是以林蛙体为原料采用超声提取抗菌肽，提取的抗菌肽是分子量为4KDa最适pH值为3.5，等电点pI值为8.0一10.5的碱性多肽。以上专利均以抗菌肽为保护内容，申请保护其在抗菌方面的作用，所述抗菌是指抵抗细菌和真菌包括大肠杆菌、绿脓杆菌等革兰氏阴性菌和金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌及临床耐药菌克雷伯杆菌、鲍曼不动杆菌、白色念珠菌、酵母菌的一种或多种；并且抗菌治疗途径均为外用给药。CN103432058A“林蛙胶原蛋白液及其制备工艺”是以林蛙皮提取物、西洋参皂甙、五味子浸出液、芦荟提取物和水配制而成；CN102492760A“一种利用复合酶生产活性东北林蛙胶原蛋白低聚肽的方法”是以干东北林蛙皮为原料；CN102229972A“制备林蛙皮胶原蛋白肽的方法”是以林蛙皮为原料，以上三个专利均是以林蛙皮为原料或主要原料提取林蛙皮中所含的胶原蛋白。

现有技术中的提取方法均未提取林蛙含有的多糖和钙离子，且仅单纯提取林蛙抗菌肽，或单纯提取林蛙胶原蛋白，最主要的是提取的抗菌肽或胶原蛋白的分子量范围不固定，差值较大，未有详细说明，未将有效成分合理利用。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种林蛙提取混合液，其是由如下步骤制备得到：

(1)将10～45重量份林蛙干除杂除尘后分别经20～100目粉碎，使林蛙干粉碎物的粒径在500μm以下，按照1g：1～10mL的比例加入复合酶水解液，复合酶水解液中含木瓜蛋白酶1～5wt％、胰蛋白酶2～4wt％，风味蛋白酶1～3wt％，酶解温度为50～55℃，酶解时间为1～2h，酶解pH为7.0～7.5，而后85～90℃下灭酶5～15min，将混合物在温度10～30℃时离心，离心时间为1～5min，离心转速为2000～4000rpm，取离心后混合液体积20～40％的上层上清液，此时上层上清液中含有林蛙干短肽胶原蛋白(由于离心力的作用，短链胶原蛋白将集中在上层上清液中，长链蛋白分子将会集中在混合液的中下层剩余混合物中)，其分子量为2～3KDa，等电点pI值为7.5～7.8，其中碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸、组氨酸)占上层上清液的11.04～12.89％(质量比)，酸性氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸)占上层上清液的17.99～19.13％(质量比)。

取上清后剩余混合物(原体积的60～80％)放入胶体磨，研磨2～15min，使混合物的平均粒径在300μm以下；将混合物放入高剪切分散乳化机内，剪切1～15min，使混合物平均粒径在100～200μm之间，将混合物进行喷雾干燥成粉末状，此时得到林蛙干提取短肽胶原蛋白后剩余纤维、骨质等物质的超微粉；