[发明专利]MicroRNA-433在制备治疗高血压肾衰竭药物中的应用及其药物

说明书

技术领域

本发明涉及MicroRNA-433在制备治疗高血压肾衰竭药物中的应用及其药物。

背景技术

高血压肾病变已是末期肾病最重要的原因之一，而高血压也是慢性肾衰竭最常见的并发症。

在慢性高血压肾脏病时，因为应肾丝球过滤率的下降，肾脏本身会造成第二型血管张力素(angiotensin II，AngII)，而Ang II会收缩出球小动脉造成肾丝球压力上升来代偿肾丝球过滤率的下降。同时，AngII通过活化TGF-beta/Smad信号引致肾脏纤维化，最后，肾脏纤维化导致终末期肾功能衰竭，由于TGF-beta/Smad信号调控在肾脏疾病中的细胞外基质的表达，所以针对TGF-beta信号是控制纤维化的一个有吸引力的治疗方法。然而，在TGF-beta信号传导途径的复杂性使得选择适当的治疗靶点困难。尤其是，针对在TGF-beta信号传导途径中的单个元素的方法被证明效用不大。

在过去的十年中，许多策略以直接阻断TGF-beta影响已经被开发，包括使用TGF-beta的中和抗体、抑制TGF-beta的寡脱氧核苷酸(ODN)、可溶性人类TGF-betaⅡ型受体，或TGF-beta受体激酶的特异性抑制剂。然而，通过深入调查后，发现采用这些策略作没有产生如预期的有效的结果。这可能是由于封锁TGF-beta信号上游传导途径会损害TGF-beta的有效的抗发炎特性，并随后促进肾脏炎症。另一方面，细胞内的Smad通路的串扰会阻碍靶向TGF-beta与TGF-beta受体激酶的策略。

发明内容

本发明的主要目的在于针对现有的治疗高血压肾衰竭药物的不足，提供MicroRNA-433在制备治疗高血压肾衰竭药物中的应用及其药物。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种将抑制miR-433的物质用于制备治疗高血压肾衰竭药物的应用，使用敲低miR-433质粒制作所述药物。

优选地：

将所述敲低miR-433质粒与微泡造影剂混合以制作所述药物。

所述微泡造影剂为六氟化硫微泡造影剂，优选造影剂(Bracco imaging B.V,Plan-Les-Quates Geneve,Switzerland)。

所述敲低miR-433质粒与所述微泡造影剂的体积比为1:1。

构造敲低miR-433的质粒是将一个针对miR-433之初级转录物的短发夹RNA(shRNA)合成在载体中，以产生一个miR-433的小发夹RNA，其中所述短发夹RNA的序列为:GAG AAG GAT CAT GAT GGG CTT，优选地，所述载体为pSilencer4.1载体(Invitrogen，Carlsbad,VA,USA)

采用不含内毒素的质粒试剂盒产生敲低miR-433的质粒。

制作含1μM/ml的敲低miR-433的shRNA质粒的微泡的静脉注射剂。

一种治疗高血压肾衰竭的药物，含有敲低miR-433质粒。

还含有微泡造影剂，优选地，所述敲低miR-433质粒与所述微泡造影剂的体积比为1:1。

采用含1μM/ml的敲低miR-433的shRNA质粒的静脉注射剂。

本发明的有益效果：

本发明提供抑制miR-433以治疗高血压肾衰竭的药物及其制备方法。抑制miR-433的治疗不单有效抑制AngII信号,也抑制从AngII信号活化的TGF-beta信号，压制Smad3蛋白的磷酸化机制去调控Smad3的激活，而且减少体内肾纤维化和中止肾纤维化的进展。miR-433的抑制将会是打击慢性高血压肾脏病的一种有效的治疗。

此外，MicroRNA的治疗优点是，它们能针对参与同一信号途径内多个基因。与此相反，传统疗法只针对单一蛋白，而使其他蛋白不会受到影响，因此未必能够有效调控维持的病理机制。在另一方面中，miRNA具有特定的和定义的目标在该疾病的发病机制，从而导致治疗的高特异性。其它的优点是长效作用和生物利用度，实际上的microRNA调节剂可以在体内大部分组织有效地作用。

本发明提供的药物可用于实现新型、安全、有效、可控制的基因疗法,来抑制从AngII信号活化的TGF-beta介导的肾脏纤维化。

附图说明

图1A示出未使用本发明实施例的药物时和使用本发明实施例的药物之后的实时PCR检测结果；

图1B示出未使用本发明实施例的药物时和使用本发明实施例的药物之后的免疫组织化学结果；