[发明专利]乙型肝炎病毒表面抗原定量测定试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种乙型肝炎病毒表面抗原定量测定试剂盒，包括

测HBsAg磁微粒：标记有HBsAb单克隆抗体的磁性微粒子；

测HBsAg示踪结合物：标记有HBsAb多克隆抗体的异鲁米诺；

校准品：一低含量表面抗原的溶液和一高含量表面抗原的溶液；

分析缓冲液：含牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液；

样本稀释液：含牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液。

2.一种制备权利要求1所述乙型肝炎病毒表面抗原定量测定试剂盒的方法，其特征是具体步骤如下：

（1）制备测HBsAg磁微粒    将带羧基磁微粒与EDC按质量比1∶2，磁微粒与HBsAb单克隆抗体的比例为每毫克磁微粒标记20μg的单抗，在22~26℃混匀的情况下进行标记，标记时间1小时，标记后采用甘氨酸封闭多余的位点，使之浓度达到25mM，反应30分钟，洗涤三次，加入磁微粒保存液，所述磁微粒保存液为含1%牛血清白蛋白的0.01M PBS缓冲系统，使之终浓度达到每20μL测HBsAg磁微粒中含有20μg的磁微粒标记单抗，2~8℃保存；

（2）制备测HBsAg示踪结合物    HBsAb多克隆抗体与异鲁米诺的标记，反应体系为：戊二醛使用浓度为1.0%-2.0%，HBsAb多克隆抗体与异鲁米诺的质量比为2∶1，在22~26℃反应1.5小时，用pH7.2-7.4的0.01M PBS进行透析，透析后加入等体积甘油-20℃存放；最终将异鲁米诺标记多抗用示踪结合物稀释液，所述示踪结合物稀释液为含20%小牛血清的0.01M PBS缓冲系统，按照1∶3000的稀释比例稀释成测HBsAg示踪结合物；

（3）制备分析缓冲液    磷酸二氢钠 0.39g/L、磷酸氢二钠 2.68g/L、氯化钠 8.50g/L、牛血清白蛋白10g/L、硫柳汞 1.0g/L，按上述配方配制稀释液；

（4）制备样本稀释液   磷酸二氢钠 0.39g/L、磷酸氢二钠 2.68g/L、氯化钠 8.50g/L、牛血清白蛋白10g/L、硫柳汞 1.0g/L，按上述配方配制稀释液；

（5）校准品包括校准品1和校准品2，其中校准品1为低含量表面抗原的溶液，校准品2为高含量表面抗原的溶液。

3.根据权利要求2所述乙型肝炎病毒表面抗原定量测定试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤（2）中戊二醛使用浓度为1.25%。