[发明专利]用于腹腔开放治疗及修复的仿生腹膜及其制备方法

权利要求书

1.一种用于腹腔开放治疗及修复的仿生腹膜，其特征在于：包括水凝胶，搭载于该水凝胶上的聚乳酸－羟基乙酸微球，以及覆盖于水凝胶及聚乳酸－羟基乙酸微球上的纳米纤维膜。

2.根据权利要求1所述的用于腹腔开放治疗及修复的仿生腹膜，其特征在于：所述的水凝胶包括纤维连接蛋白与细胞作用位点的聚乙二醇双马来酸单酯、I型胶原与细胞结合位点的聚乙二醇双丙烯酸酯和光引发剂艳固佳。

3.根据权利要求1所述的用于腹腔开放治疗及修复的仿生腹膜，其特征在于：所述的聚乳酸－羟基乙酸微球是由乳酸和羟基酸聚合而成的聚乳酸－羟基乙酸共聚物。

4.根据权利要求1所述的用于腹腔开放治疗及修复的仿生腹膜，其特征在于：所述的纳米纤维膜包括聚乙二醇聚醚氨酯脲和富血小板血浆，其体积比为1:1-1.5。

5.根据权利要求4所述的用于腹腔开放治疗及修复的仿生腹膜，其特征在于：所述的纳米纤维膜还包括可复合骨髓来源间充质干细胞，所述的纳米纤维膜为多孔材料，干细胞的含量为每100μl细胞培养液含2.5×10⁵BMSCs，每100μl细胞培养液加入每孔底层纳米纤维膜介质。

6.一种仿生腹膜的制备方法，其包括以下步骤：

S1制备水凝胶：将浓度分别为0.5-2％(w/v)、8-10％(w/v)和0.05-0.2％(w/v)的聚乙二醇双马来酸单酯、聚乙二醇双丙烯酸酯和光引发剂Irgacure溶入磷酸盐缓冲液PBS中，置于紫外灯下15-18cm处照射10-15min，成胶完全后，PBS溶液漂洗3-5次；

S2在水凝胶上搭载聚乳酸－羟基乙酸微球：该聚乳酸－羟基乙酸微球是由乳酸和羟基酸聚合而成的聚乳酸－羟基乙酸共聚物，并将该共聚物搭载于水凝胶上；

S3制备纳米纤维膜：将聚乙二醇聚醚氨酯脲加入到六氟异丙醇中，搅拌至溶解，得到浓度为10-15％(w/v)的聚合物溶液，并通过纺丝设备制得纳米纤维膜；

S4覆膜：将上述纳米纤维膜覆盖于搭载有聚乳酸－羟基乙酸微球的水凝胶上，得到仿生腹膜。

7.根据权利要求6所述的仿生腹膜的制备方法，其特征在于：所述的步骤(3)中，所述的纺丝设备为静电纺丝机，通过注射器吸取聚合物溶液固定于静电纺丝机上微量推进进行纺丝和喷涂制得纳米纤维膜。

8.根据权利要求7所述的仿生腹膜的制备方法，其特征在于：所述的步骤(3)中，分别用注射器吸取富血小板血浆与聚合物溶液一起进行纺丝和喷涂得到纳米纤维膜上。

9.根据权利要求7所述的仿生腹膜的制备方法，其特征在于：所述的步骤(3)中，将含2.5×10⁵BMSC的100μl细胞培养液加入每孔底层介质，在5％CO₂，37℃的条件下培养，每隔一天更换培养液一次，得到干细胞培养液。

10.根据权利要求9所述的仿生腹膜的制备方法，其特征在于：所述的干细胞培养液通过注射器吸取后，与聚合物溶液一起纺丝和喷涂制得纳米纤维膜。

11.根据权利要求8或10所述的仿生腹膜的制备方法，其特征在于：所述的聚乙二醇聚醚氨酯脲在静电纺织机上纺丝的参数设置为：微量推进速度：1.5ml/h；毛细管电压：+12KV；静电纺织机的喷头和滚筒距离：20cm。

12.根据权利要求8或10所述的仿生腹膜的制备方法，其特征在于：所述的干细胞培养液在静电纺织机上喷涂的参数设置为：微量推进速度：0.2ml/min；毛细管电压：+7KV；静电纺织机的喷头和滚筒距离：4cm。

13.根据权利要求12所述的仿生腹膜的制备方法，其特征在于：所述滚筒参数设置为：滚筒电压：-4KV；滚筒旋转速度：250rmp/min；横向移动速度：0.15cm/s；横向移动幅度：8cm。

14.根据权利要求6所述的仿生腹膜的制备方法，其特征在于：所述的聚乳酸－羟基乙酸微球制备方法包括：

S21将重量比为1：1的乳酸和羟基酸共100mg溶解在4ml二氯甲烷(CH₂Cl₂)中，制成油相；

S22将成纤维细胞生长因子样品溶于500μl去离子水中形成水相；

S23将该水相加入到油相中，混合物用超声探针震荡处理，匀化后形成初乳(W1/O)，将0.5gPVA加入100ml去离子水中形成含0.5％(w/v)PVA的油相(W2)，将初乳倒入油相(W2)中，机械搅拌器400rpm搅拌4h，搅拌过程中溶剂蒸发，得到胶态悬浮的聚乳酸－羟基乙酸微球。