[发明专利]一种深层液态发酵生产樟芝胞外多糖的方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种深层液态发酵生产樟芝胞外多糖的方法。

背景技术

樟芝又名樟生薄孔菌，牛樟菇，牛樟芝，红樟芝，樟菇，樟菰，樟窟内菰，红樟，隶属真菌门，担子菌亚门，层菌纲，多孔菌科，薄孔菌属多年生蕈类，是台湾特有一种珍稀、尚未开发的名贵食、药用真菌。只生长在台湾山区海拔450～2000公尺间特有的牛樟树树干腐朽之心材内壁，或枯死倒伏之牛樟木材阴暗潮湿之表面，发现着实不易。樟芝作为台湾特有的菌种，自然环境中牛樟树是其唯一的寄主，一般真菌不能在其上生长。由于樟芝可造成牛樟树中心空洞腐朽，加上人对牛樟树乱砍乱伐，致使牛樟树数量相当稀少，目前已被列为一级保育树种。近百年来，牛樟树难得一见，而能够长出牛樟芝的牛樟树则更少，其结果导致野生樟芝资源严重短缺。因此樟芝十分珍贵，在港澳台被称为“神芝”，台湾民间则称樟芝为“森林中的红宝石”。

近年来，研究得知樟芝能有效治疗肝病及其它方面如：抗肿瘤、抗病毒、抗过敏、降血脂、降血糖的疾病。樟芝中含有多种生理活性成分，如多糖、三萜类化合物、超氧歧化酶(SOD)、腺苷、蛋白质(含免疫蛋白)、多种维生素、微量元素(钙、磷)、核酸、凝集素、氨基酸、胆固醇、木质素、血压稳定物质等。研究发现，樟芝多糖是樟芝中的主要活性物质，它在樟芝发酵上清液中的含量高达3％，具有免疫生理活性、预防及控制肿瘤等生理活性，主要含β‐D‐glucan(β‐D‐葡聚糖))其作用是透过激发巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞以及自然杀手细胞等来增强免疫功能，进而达到抗肿瘤的效果。此外樟芝多糖还有强心、降血压、降血糖、抗血栓等功效。

目前国内外对樟芝的研究还不是很透彻，采取的主要培养法是固体发酵法。由于此法发酵周期长，劳动强度大，占地面积广，受季节限制，而且容易污染，不宜进行纯种发酵等缺点，导致樟芝发酵规模一直得不到扩大。为此，以生物技术方法进行天然樟芝液体深层发酵培养可以缩短培养时间，获得大量且纯正的菌丝体和多糖，成本低，可实现发酵工业的连续化、自动化，提升生产效益，成为十分值得开发的途径。国内外也有少量大专院校的研究者对樟芝的深层发酵进行过研究，但往往其主要侧重点是如何获取更高的生物量，只有少部分研究者关注樟芝的功效成分多糖的研究，但往往都仅局限于小试的摇瓶试验，属于基础研究阶段，并且其生物量和活性产物胞外糖得率比较低，生产成本过于昂贵，其工艺需进一步提升，若要达到规模化和产业化的生产樟芝多糖还需要进行大量的研究和实验工作。

发明内容

本发明的目的是为了解决工业化规模生产樟芝多糖的技术瓶颈，采用液态发酵生产樟芝多糖克服了固态发酵周期长、投资大、受季节限制、难以产业化等弊端，采用此发明能够连续、自动化、产业化的生产出高品质的樟芝多糖。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种制备樟芝发酵液的方法，该方法包括下述步骤：

将樟芝种子培养液接入灭菌后的液体发酵培养基进行深层液态发酵得到樟芝发酵培养液；所述的深层液态发酵接种量为10～20％(g/100g，下同)，通风比为1：0.3‐1.0vvm，罐压0.02～0.05Mpa，在22～30℃下培养4～7天；所述的液体发酵培养基为：葡萄糖1-3％、淀粉1-3％、蛋白胨0.1-0.5％、麸皮0.1-0.5％、磷酸二氢钾0.1-0.5％、七水硫酸镁0.1-0.5％、消泡剂0.01-0.05％、20000u/ml的耐高温α-淀粉酶0.001-0.007％(v/v)，调节pH值4.8。上述培养基组成中除高温α-淀粉酶外其余的“％”均表示g/100ml。

所述的消泡剂可以为植物油(豆油、菜籽油)类、有机醚类等物质。

其中所述的樟芝种子培养液优选通过二级培养获得，具体方法如下：

1)一级种子培养：将经活化摇瓶菌种接入灭菌后的液体种子培养基，接种量为0.1～2％，通风比为1：0.3‐1.0vvm，罐压0.02～0.05Mpa，在22～30℃下培养6～8天，得到樟芝一级种子培养液，备用；

2)二级种子培养：将步骤1)所得的一级种子培养液接入灭菌后的液体种子培养基，接种量为10～20％，通风比为1：0.3‐1.0vvm，罐压0.02～0.05Mpa，在22～30℃下培养4～7天，得到所述的樟芝种子培养液。