[发明专利]一种快速鉴别杂交水牛染色体核型的方法

权利要求书

1.一种快速鉴别杂交水牛染色体核型的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)提取杂交水牛的总DNA；

2)根据水牛RBP3基因的两个突变位点的核苷酸序列，设计两组引物对——RBP3-1引物对和RBP3-2引物对，其中：

RBP3-1的正向引物为5’-GTGCCGCTGCTACTCTCTTACT-3’，

RBP3-1的反向引物为5’-TCCTTACCTATGTGACGCTTGACG-3’；

RBP3-2的正向引物为5’-AACACCTATCCACGACCTTTATCAT-3’，

RBP3-2的反向引物为5’-AGTTGCTTTAGCGAAGACACTATTATC-3’；

3)分别用步骤2)中的两组引物对杂交水牛的DNA进行PCR扩增，得到两种扩增产物；

4)分别对步骤3)所得到的两种扩增产物进行酶切、分型：RBP3-1引物对的扩增产物选用Ecil内切酶，酶切条带中出现2条带确认为2N＝50核型；RBP3-2引物对的扩增产物选用Drdl内切酶，酶切条带中出现1条带确认为2N＝48核型，酶切条带中出现3条带确认为2N＝49核型。

2.如权利要求1所述的快速鉴别杂交水牛染色体核型的方法，其特征在于：步骤3)中的PCR扩增体系为：双蒸水8μL、Mix10μL、正向引物0.5μL、反向引物0.5μL、杂交水牛DNA1μL。

3.如权利要求1或2所述的快速鉴别杂交水牛染色体核型的方法，其特征在于：步骤4)中所述的酶切，是将两种扩增产物5μL分别与双蒸水3.5μL、10×Buffer1μL、10U/μL的内切酶0.5μL混匀后离心，37℃培养箱放置2-4h。