[发明专利]利用药物分子伴侣改善生物制剂的生产和纯化

权利要求书

1.一种改善重组酸β-葡萄糖苷酶生产的方法，该方法包括：

将宿主细胞与对于该重组酸β-葡萄糖苷酶特异的药物分子伴侣进行体外接触，其中该宿主细胞表达该重组酸β-葡萄糖苷酶；和

从该宿主细胞中纯化该重组酸β-葡萄糖苷酶。

2.如权利要求1所述的方法，其中该宿主细胞是哺乳动物细胞。

3.如权利要求1所述的方法，其中该药物分子伴侣是选自下组，该组由以下各项组成：异桑叶生物碱、C-苯甲基异桑叶生物碱、N-烷基(C9-12)-DNJ、葡糖并咪唑、C-烷基-IFG、N-烷基-β-井冈霉烯胺、氟奋乃静、N-十二烷基-DNJ、打碗花素A₃、打碗花素B₁、打碗花素B₂以及打碗花素C₁。

4.如权利要求3所述的方法，其中该药物分子伴侣是异桑叶生物碱。

5.如权利要求1所述的方法，其中该宿主细胞是选自下组，该组由以下各项组成：CHO细胞、HeLa细胞、HEK-293细胞、293T细胞、COS细胞、COS-7细胞、小鼠原代成肌细胞以及NIH3T3细胞。

6.如权利要求1所述的方法，其中将宿主细胞与对于该重组酸β-葡萄糖苷酶特异的药物分子伴侣接触使得该重组酸β-葡萄糖苷酶稳定为合适的野生型构象，该构象在该细胞的内质网中不被降解。

7.如权利要求1所述的方法，其中将宿主细胞与对于该重组酸β-葡萄糖苷酶特异的药物分子伴侣接触降低了与该重组酸β-葡萄糖苷酶的过量表达相关的内质网应激。

8.如权利要求1所述的方法，其中将宿主细胞与对于该重组酸β-葡萄糖苷酶特异的药物分子伴侣接触增加了该重组酸β-葡萄糖苷酶到该细胞的内质网外部的输出。

9.如权利要求1所述的方法，其中将宿主细胞与对于该重组酸β-葡萄糖苷酶特异的药物分子伴侣接触增加了该重组酸β-葡萄糖苷酶到细胞外部的分泌，并且分泌的重组酸β-葡萄糖苷酶是被纯化的。

10.如权利要求1所述的方法，其中将宿主细胞与对于该重组酸β-葡萄糖苷酶特异的药物分子伴侣接触增加了该重组酸β-葡萄糖苷酶在大于5.0的pH值下的稳定性。

11.如权利要求1所述的方法，还包括将纯化的重组酸β-葡萄糖苷酶在大于5.0的pH值下存储。

12.如权利要求1所述的方法，其中该重组酸β-葡萄糖苷酶被纯化为纯度是至少95％。

13.如权利要求1所述的方法，其中纯化该重组酸β-葡萄糖苷酶包括硫酸铵沉淀、含有疏水性相互作用树脂的柱色谱、将该重组酸β-葡萄糖苷酶与阳离子交换树脂接触、将该重组酸β-葡萄糖苷酶与阴离子交换树脂或将该重组酸β-葡萄糖苷酶与色谱聚焦树脂接触。

14.一种改善重组酸β-葡萄糖苷酶生产的方法，该方法包括：

将表达该重组酸β-葡萄糖苷酶的CHO宿主细胞与异桑叶生物碱或它的盐进行体外接触；和

从该宿主细胞中纯化该重组酸β-葡萄糖苷酶，其中该异桑叶生物碱或它的盐以增加该重组酸β-葡萄糖苷酶在纯化期间的稳定性的有效量与该宿主细胞接触。

15.如权利要求14所述的方法，还包括存储经纯化的重组酸β-葡萄糖苷酶，其中该异桑叶生物碱增加该重组酸β-葡萄糖苷酶在纯化期间的稳定性，并且其中该重组酸β-葡萄糖苷酶的稳定性大于未与该异桑叶生物碱接触的重组酸β-葡萄糖苷酶的稳定性。

16.如权利要求14所述的方法，还包括将纯化的重组酸β-葡萄糖苷酶在大于5.0的pH值下存储。