[发明专利]一种PMMoV贵州分离物ID-ELISA检测试剂盒及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种PMMoV贵州分离物ID-ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括：阳性对照、阴性对照、PMMoV特异性抗血清、酶标二抗、显色底物、封闭液、包被缓冲液、PBST洗涤缓冲液、抗体稀释缓冲液、底物缓冲液以及96孔酶标板；其中，PMMoV特异性抗血清的制备包括以下具体步骤：

(1)根据GenBank中公布的PMMoV各地分离物的CP序列设计一对RT-PCR引物：

正向引物：5'-CTACCCATGGCATACACAGTTACCAGTG，

反向引物：5'-GGAATTCAGGAGTTGTAGCCCACGTAA；

(2)以感染PMMoV贵州辣椒分离物的组织总RNA作为模板，进行RT-PCR扩增、纯化以及回收，，得到CP基因片段；

(3)将所述CP基因片段和原核表达载体pET32a(+)以Nco I和EcoR I两种DNA限制性内切酶进行双酶切处理、片段回收、连接、重组质粒转化大肠杆菌、重组CP蛋白表达以及重组CP蛋白回收；

(4)将所述重组CP蛋白作为抗原免疫家兔制备特异性PMMoV抗血清，免疫后取兔血，即得到PMMoV特异性抗血清。

2.如权利要求1所述的PMMoV贵州分离物ID-ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为含PMMoV病毒的辣椒叶片冷冻干燥后研磨成的细粉；所述阴性对照为健康无毒辣椒叶片冷冻干燥后研磨成的细粉；所述酶标二抗为碱性磷酸酶标记的羊抗兔抗体溶液。

3.权利要求2所述的PMMoV贵州分离物ID-ELISA检测试剂盒在辣椒PMMoV的检测方面的应用。